[發(fā)明專利]抑制人惡性腦膠質(zhì)瘤增殖的靶向STAT3基因的siRNA及其表達(dá)載體和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410101962.6
• 申請(qǐng)日: 2014-03-19
• 公開（公告）號(hào): CN103952406A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馮學(xué)泉;王金環(huán);李牧;徐新女;張飚;吳靜超
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津市第一中心醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;C12N15/867;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 天津市宗欣專利商標(biāo)代理有限公司 12103
• 代理人: 董光仁

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)，特別是一種抑制人惡性腦膠質(zhì)瘤增殖的靶向STAT3基因的siRNA及其表達(dá)載體和應(yīng)用。?

背景技術(shù)

STAT3是IL-6/JAK-STATs轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的重要成員，分子量89KD左右，最初發(fā)現(xiàn)并認(rèn)識(shí)STAT3是從研究細(xì)胞因子IL-6介導(dǎo)的急性期反應(yīng)時(shí)開始，它是一種轉(zhuǎn)錄因子，促進(jìn)眾多基因的轉(zhuǎn)錄。后來(lái)隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)STAT3不僅參與細(xì)胞因子介導(dǎo)的急性期反應(yīng)，而且在人類的多種惡性腫瘤中STAT3是異?；罨?，調(diào)控腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為，其中包括惡性腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤。?

近年的研究發(fā)現(xiàn)，一些小的雙鏈RNA（double-stranded?RNA，dsRNA）可以高效、特異地促使體內(nèi)特定基因mRNA降解，誘使細(xì)胞出現(xiàn)特定基因缺失的表型，這種技術(shù)即RNAi。在RNAi作用的起始階段中外源性或內(nèi)源性的雙鏈RNA被Dicer酶切割為19～21bp的小分子干擾RNA片段（small?interfering?RNAs?，siRNAs）；隨后siRNA?與核酶復(fù)合物結(jié)合后形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物（RNA?induced?silencing?complex，RISC）；?RISC激活后通過(guò)堿基配對(duì)定位到同源mRNA轉(zhuǎn)錄本上并切割mRNA，從而部分或完全抑制目的基因的表達(dá)。另一方面，細(xì)胞在RNA依賴性RNA聚合酶作用下，可以siRNA為引物、以mRNA為模板，合成出mRNA的互補(bǔ)鏈，從而使mRNA也變成了dsRNA，然后在Dicer酶的作用下再次被裂解成siRNA。這些新生成的siRNA也具有誘發(fā)RNAi的作用，通過(guò)這個(gè)鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，細(xì)胞內(nèi)的siRNA大大增加，顯著增加了對(duì)基因表達(dá)的抑制。?

從RNAi的作用機(jī)制中可見(jiàn)，這種基因表達(dá)調(diào)控方法屬于轉(zhuǎn)錄后的調(diào)節(jié)并具有明顯優(yōu)勢(shì)：RNAi基因抑制效果確切，應(yīng)用微量的siRNA即可使其編碼致病基因產(chǎn)物的含量下降90%以上、甚至可以達(dá)到基因敲除的效果；其次,?RNAi抑制具有嚴(yán)格的序列特異性，治療的針對(duì)性強(qiáng)，因而應(yīng)用此項(xiàng)技術(shù)能夠同時(shí)抑制同一基因的多個(gè)靶點(diǎn)或多個(gè)不同基因而不致相互干擾；同時(shí)，RNAi的作用具有級(jí)聯(lián)式放大效應(yīng)和高穿透性更適合惡性腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究；此外，RNAi序列識(shí)別的特異性即或?qū)τ梢吧忘c(diǎn)突變形成的癌基因也能夠產(chǎn)生準(zhǔn)確有效的封閉效果而對(duì)野生型基因沒(méi)有影響。在對(duì)多種腫瘤細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)中也證實(shí)：腫瘤細(xì)胞中均存在著RNAi的機(jī)制，化學(xué)合成、質(zhì)粒/病毒或其他方式介導(dǎo)的RNAi可以有效地抑制內(nèi)源性RNA的表達(dá)。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明就是為了解決膠質(zhì)瘤等腫瘤基因治療問(wèn)題，以RNA干擾機(jī)制為基礎(chǔ)，通過(guò)人工合成或表達(dá)質(zhì)粒序列轉(zhuǎn)錄形成的STAT3小雙鏈RNA(siRNA)可以靶向作用于STAT3基因的mRNA，從而阻斷其翻譯過(guò)程，達(dá)到使STAT3基因表達(dá)降低的結(jié)果，而提供一種抑制人惡性腦膠質(zhì)瘤增殖的靶向STAT3基因的siRNA及其表達(dá)載體和應(yīng)用。?

本發(fā)明是按照以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。?

一種抑制人惡性腦膠質(zhì)瘤增殖的靶向STAT3基因的siRNA，該siRNA具有特異性抑制惡性腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的作用，其堿基序列為：5'-TGAAATCATCATGGGCTAT-3'??。??????????????????????

所述抑制人惡性腦膠質(zhì)瘤增殖的靶向STAT3基因的siRNA，其特征在于：該siRNA靶向人的基因序列號(hào)為NM_003150的STAT3轉(zhuǎn)錄本，作用于該基因序列mRNA的第2169至2188位。

一種抑制人惡性腦膠質(zhì)瘤增殖的靶向STAT3基因的siRNA慢病毒表達(dá)載體，其包含如權(quán)利要求1所述的siRNA，具有特異性抑制人STAT3基因表達(dá)，特異性抑制人惡性腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的作用。?

所述抑制人惡性腦膠質(zhì)瘤增殖的靶向STAT3基因的siRNA慢病毒表達(dá)載體，該表達(dá)載體包含有pGC-LV載體，其DNA序列中病毒表達(dá)載體是慢病毒。?

所述抑制人惡性腦膠質(zhì)瘤增殖的靶向STAT3基因的siRNA在制備抑制人惡性腦膠質(zhì)瘤治療藥物中的應(yīng)用。?

所述抑制人惡性腦膠質(zhì)瘤增殖的靶向STAT3基因的siRNA慢病毒表達(dá)載體在制備抑制人惡性腦膠質(zhì)瘤治療藥物中的應(yīng)用。?