[發明專利]一種尿酸的檢測方法及檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201410101067.4
• 申請日: 2014-03-19
• 公開（公告）號: CN103837487A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發明（設計）人: 孫希武;郝樹彬;趙元明;李玉耀;王永慶
• 申請（專利權）人: 濰坊鑫澤生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N33/53
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 李江

技術領域

?本發明涉及一種尿酸的檢測方法，具體地說，涉及一種酶學速率法測定人血清尿酸的檢測方法及檢測試劑盒，適用于體外定量測定人血清、血漿中的尿酸的濃度，屬于醫用診斷制劑技術領域。

背景技術

尿酸是嘌呤、核酸和核蛋白的代謝產物。生物細胞中的DNA（脫氧核糖核酸）和RNA（核糖核酸）由核苷酸組成。核酸氧化分解后的產物之一就是嘌呤，所以說嘌呤是細胞的組成成分。體內的老舊細胞，富含嘌呤的食物在體內新陳代謝過程中，其核酸氧化分解產物就有嘌呤。嘌呤會在肝臟中再次氧化為2，6，8--三氧嘌呤又稱為尿酸。因此，體內尿酸濃度的異常可指示這些物質代謝的障礙。

體液中尿酸含量變化，可以充分反映出人體內代謝、免疫等機能的狀況。正常情況下，體內的尿酸大約有1200毫克，每天新生成約600毫克，同時排泄掉600毫克，處于平衡的狀態。血中尿酸全部從腎小球濾過，正常人體內尿酸的生成與排泄速度較恒定。如果體內產生過多來不及排泄或者尿酸排泄機制退化，則體內尿酸滯留過多，當血液尿酸濃度大于7毫克/升，導致人體體液變酸，影響人體細胞的正常功能，長期將會引發痛風。

尿酸增高見于痛風、急性或慢性腎小球腎炎、腎結核、腎盂積水、子癇、慢性白血病、紅細胞增多癥、攝入過多含核蛋白食物、尿毒癥腎炎、肝臟疾患、氯仿和鉛中毒、甲狀腺功能減低、多發性骨髓瘤、白血病、妊娠反應紅細胞增多癥。尿酸減低：見于惡性貧血、Fanconi綜合征、使用阿司匹林、先天性黃嘌吟氧化酶和嘌吟核苷磷酸化酶缺乏等。

尿酸的測定可作為腎功能、痛風疾病的指標，它在痛風的診斷和腎功能方面有著重要的意義。

測定尿酸主要有磷鎢酸法、尿酸酶法（紫外分光法，氧電極法，偶聯過氧化物酶比色法，固相酶法）、色譜分析法（高效液相色譜－電化學檢測法，反相高效液相色譜法，氣相色譜－質譜分析法）等。磷鎢酸法特異性、靈敏度較低，目前基本不用。色譜分析法操作繁瑣，價格高，對臨床的意義不大。尿酸酶法中的紫外分光法特異性強，操作簡便，但不易實現自動化分析；氧電極法需要專用的分析設備；固相酶法的酶不穩定，活力不易保存；偶聯過氧化物酶比色法靈敏度高、快速、安全、易實現自動化，適應臨床的需要,?目前國內使用的基本全部為此方法，但此方法為終點法測定，有一個缺點就是易受血清本底干擾，而且反應時間長，大大影響了結果的準確性和測定效率。

發明內容

本發明要解決的技術問題是針對以上不足，提供一種尿酸的檢測方法，用于體外定量測定人血清、血漿中的尿酸的濃度，克服了現有檢測方法易受血清本底干擾、反應時間長的缺陷，本發明檢測方法以酶催化法，使用酶學速率測定法，完全排除了血清本底的干擾，大大縮短了反應時間，操作簡便，結果準確可靠，適用于各種生化分析儀器。

本發明的另一目的是提供一種實施該檢測方法的檢測試劑盒。

為解決以上問題，本發明采用的技術方案是：一種尿酸的檢測方法，其特征在于：所述檢測方法為采用酶學速率測定法，根據在波長546nm處，反應體系吸光度的升高速率與樣本中尿酸的濃度成正比，延遲30～60秒后，測定30～180秒內的吸光度升高速率，得到尿酸的含量。

一種優化方案，所述吸光度上升速率測定步驟：

a、制備反應液

取空白管、標準管及樣本管，分別加入緩沖液；在樣本管、空白管及標準管內對應加入待測樣本、蒸餾水及標準液，混勻，37℃條件下保溫3～5分鐘，再加入酶試劑，混勻，得到反應液；或

將緩沖液和酶試劑按比例混合配制成試劑工作液，穩定3～5分鐘；然后取空白管、標準管及樣本管，分別加入試劑工作液；再分別在樣本管、空白管及標準管內對應加入待測樣本、蒸餾水及標準液，得到反應液；

b、反應液在37℃條件下反應，延遲30～60秒后，在波長546nm處讀取反應液的吸光度變化，讀數間隔時間為30～180秒，計算平均每分鐘吸光度變化率，得到空白管、標準管及樣本管內反應液的每分鐘吸光度變化率。

進一步地，所述緩沖液與酶試劑的體積比為5:1～1:1；緩沖液、酶試劑之和與待測樣本的體積比為100:1～20:1。??

進一步地，所述緩沖液為含有3.5～8mmol/L?N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽（TOOS）的0.4mol/L的磷酸鹽緩沖液。

進一步地，所述酶試劑為尿酸酶和過氧化酶溶液，尿酸酶濃度為0.2U/ml～5U/ml；過氧化酶濃度為1～10U/ml。

進一步地，所述標準液為尿酸溶液，濃度為100～400μmol/L。