[發明專利]治療心臟疾病的細胞輸送方法

在審

• 申請號: 201410100784.5
• 申請日: 2014-03-18
• 公開（公告）號: CN104922155A
• 公開（公告）日: 2015-09-23
• 發明（設計）人: 王景峰;張建華;武征
• 申請（專利權）人: 中山大學孫逸仙紀念醫院;暨南大學
• 主分類號: A61K35/545
• 分類號: A61K35/545;A61K35/28;A61K35/44;A61K35/34;A61K35/12;A61P9/00
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 萬志香;胡杰

技術領域

本發明涉及一種治療心臟疾病的細胞輸送方法，具體的說，是涉及一種利用細胞治療心臟疾病的細胞輸送方法，這種輸送方法易于治療細胞的貯留存活。

背景技術

再生醫學的研究水平和研究成果正逐步成為衡量一個國家或地區科技發展水平與健康水平的重要標志之一。對于心臟疾病患者來說，利用細胞治療的再生醫學方案對逆轉和改善心臟功能具有傳統治療手段（藥物治療和手術治療）無法比擬的優勢。世界范圍內各個研究團隊陸續發現使用各種治療細胞在動物心臟疾病模型上均可產生明顯的治療效果，改善心臟泵血功能。其作用機制與移植細胞持續性分泌的各種生長因子和細胞因子等旁分泌因素有關，可促進心臟病損組織的新生血管形成、抑制心肌纖維化和抗凋亡。更加令人鼓舞是，使用自體取材的骨髓間充質干細胞、心臟干細胞已在臨床應用水平進一步顯示了逆轉心臟疾病的發展潛力。

為了最大程度的提高移植細胞在體內條件下的存活、遷移和增殖能力，從而獲得最佳細胞治療的效果，國內外學者探討了各種不同的細胞輸送方法，主要包括：心臟直接注射法、冠狀動脈內注射法和靜脈內注射法。⑴使用心肌內注射的方法時，治療細胞可直接到達病變部位心肌，但卻存在注射細胞的初始存留量較少、注射區域的選擇、治療部位的局限和注射位置的損傷這些問題還未得到有效解決。此種方法尚有潛在的致心律失常作用，同時對操作本身及心室壁的厚度也有一定的要求：操作的侵襲性及專業性、操作前需彩超評估患者的心室壁厚度，要求的心室壁厚度應大于4mm，否則會造成醫源性的心室壁損傷。更為重要的問題是，由于移植細胞直接面對受損心肌所誘發的包含缺血、炎癥和各種促凋亡因子在內的惡劣微環境，細胞體內長期存活率很難維持。⑵各種冠狀動脈內注射法雖然注射部位接近心臟病損區域，但由于治療細胞不可能穿透血管內皮屏障，即使多次反復注射，絕大部分治療細胞最終進入體循環，在心臟病損組織內細胞初始存留率較低，治療細胞利用率較低，并且存在誘發小動脈栓塞和心律失常等并發病的風險。⑶目前較少使用的靜脈內注射的方法，雖然具有操作簡單、侵襲性小、方便重復的優勢，但是由于注射細胞無法有效避免體循環過程中肺臟、脾臟等組織中網狀內皮系統的細胞清除作用，經歷首關消除后理論上最終到達心臟病損區域的治療細胞較少，心臟病損組織內細胞初始存留率較低，體內細胞長期存活率較低，治療細胞利用率較低。

理想的心臟疾病細胞治療要求包括：①確保治療細胞的較高初始存留率。治療細胞能夠聚集心臟病損組織周圍，其旁分泌作用能夠影響到心臟病損組織，②確保治療細胞的長期體內存活率，有效維持治療效果。③確保治療細胞的利用率，較低的細胞利用率使得心臟組織治療需要較大數量的治療細胞，導致體外培養時間過長，容易錯過最佳治療時期。④確保治療細胞移植體內后生物學活性的維持。

雖然目前各種活體移植試驗（動物和人）已證實現有細胞輸送方法均能發揮一定療效，但這些方法仍無法保證治療細胞同時具備較好的初始存留率、體內存活率和細胞利用率。此外為防止注射物阻塞血管或影響心臟功能，目前的治療細胞采用不含支架材料的單細胞懸液，這與治療細胞原位組織微環境（多細胞組織或克隆樣生長干細胞）有顯著不同，如何保證移植的治療細胞在體內移植后維持穩定的生物學活性，也是心臟疾病細胞治療方向仍未解決的關鍵問題之一。因此，相對于理想的治療要求，心臟疾病的細胞治療實現臨床推廣仍面臨較多限制因素。如何進一步提高該領域細胞治療效果，急需探索一種更為有效的細胞輸送方法。

發明內容

針對現有技術的缺陷，本發明的目的是提供一種更加有效的治療心臟疾病的細胞輸送方法。

實現上述目的的技術方案如下。

一種治療心臟疾病的細胞輸送方法，包括以下步驟：

a.培養治療細胞；

b.制備治療細胞和培養介質的混懸物；

c.將混懸物置入心包腔內。

在其中一個實施例中，所述的治療細胞包含自體細胞和同種異體細胞，所述細胞包含有成體干細胞類、成體細胞類、胚胎干細胞類和誘導性多潛能分化細胞類中的任一種或多種。所述的成體干細胞類指的是骨髓間充質干細胞、心臟干細胞、脂肪干細胞、血管內皮祖細胞、臍帶血間質干細胞。

在其中一個實施例中，所述的成體細胞類指的是心肌細胞、間皮細胞，間質細胞。

所述的培養介質包含液體培養介質和膠體培養介質。

所述的液體培養介質指的是培養液、血清。

所述的膠體培養介質指的是纖維蛋白膠、細胞外基質膠、膠原凝膠、納米多

肽凝膠、天然生物凝膠、合成多聚物凝膠。