[發明專利]檢測溶液中的汞離子的方法和試劑盒

無效

• 申請號: 201410100363.2
• 申請日: 2014-03-18
• 公開（公告）號: CN104059964A
• 公開（公告）日: 2014-09-24
• 發明（設計）人: 邢怡銘;宣鋒;羅曉騰
• 申請（專利權）人: 香港科技大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N27/48
• 代理公司: 北京天昊聯合知識產權代理有限公司 11112
• 代理人: 丁業平;金小芳

1.一種檢測溶液中的汞離子的方法，該方法包括：

1）將所述溶液與含有胸腺嘧啶（T）的單鏈DNA混合形成混合物，使得所述含有胸腺嘧啶的單鏈DNA通過T-Hg²⁺-T堿基對形成雙鏈DNA，其中所述含有胸腺嘧啶的單鏈DNA的至少一個脫氧核糖核苷酸上連接有信號產生分子；

2）使步驟1）所得的雙鏈DNA與特異于雙鏈DNA的核酸外切酶接觸，使得所述核酸外切酶切割所述雙鏈DNA，釋放出連接有所述信號產生分子的脫氧核糖核苷酸；以及

3）檢測步驟2）中釋放出的所述脫氧核糖核苷酸所連接的信號產生分子。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述溶液的汞離子濃度為0.2nM至200μM。

3.根據權利要求1所述的方法，其中所述胸腺嘧啶占所述單鏈DNA的總堿基數的50%-80%。

4.根據權利要求3所述的方法，其中所述含有胸腺嘧啶的單鏈DNA具有20-40個核苷酸的長度。

5.根據權利要求1所述的方法，其中在步驟1）所述的混合物中，所述含有胸腺嘧啶的單鏈DNA的濃度為1-5μM。

6.根據權利要求1所述的方法，其中，在所述含有胸腺嘧啶的單鏈DNA中，所述連接有信號產生分子的脫氧核糖核苷酸占所述單鏈DNA的總核苷酸數的3.8%-30.8%。

7.根據權利要求1所述的方法，其中所述信號產生分子為電活性分子。

8.根據權利要求7所述的方法，其中所述電活性分子選自亞甲基藍和二茂鐵。

9.根據權利要求1所述的方法，其中在步驟2）中，所述雙鏈DNA與所述核酸外切酶在30-50℃下反應10-30分鐘。

10.根據權利要求1所述的方法，其中所述核酸外切酶選自大腸桿菌核酸外切酶III、λ噬菌體核酸外切酶、和T7噬菌體基因6核酸外切酶。

11.根據權利要求1所述的方法，其中所述信號產生分子為亞甲基藍，該信號產生分子連接在所述含有胸腺嘧啶的單鏈DNA的3’端部分；所述核酸外切酶為大腸桿菌核酸外切酶III。

12.根據權利要求1所述的方法，其中在步驟3）中，利用位于電極芯片上的帶負電荷的氧化銦錫玻璃電極檢測釋放出的所述脫氧核糖核苷酸所連接的信號產生分子。

13.根據權利要求1-12中任意一項所述的方法，其中步驟2）中所述的核酸外切酶對所述雙鏈DNA進行的切割還包括：切割該雙鏈DNA中的T-Hg²⁺-T堿基對，使該堿基對中的Hg²⁺游離出來，從而與其他含有胸腺嘧啶的單鏈DNA結合。

14.一種檢測溶液中的汞離子的試劑盒，包括：

含有胸腺嘧啶的單鏈DNA，該含有胸腺嘧啶的單鏈DNA包含至少一個連接有信號產生分子的脫氧核糖核苷酸；

特異于雙鏈DNA的核酸外切酶；以及

檢測試劑，該檢測試劑能夠與游離態的所述脫氧核糖核苷酸所連接的信號產生分子作用而產生信號。

15.根據權利要求14所述的試劑盒，其中所述胸腺嘧啶占所述單鏈DNA的總堿基數的50%-80%。

16.根據權利要求14所述的試劑盒，其中所述含有胸腺嘧啶的單鏈DNA具有20-40個核苷酸的長度。

17.根據權利要求14所述的試劑盒，其中，在所述含有胸腺嘧啶的單鏈DNA中，連接有所述信號產生分子的脫氧核糖核苷酸占所述單鏈DNA的總核苷酸數的3.8%-30.8%。

18.根據權利要求14所述的試劑盒，其中所述信號產生分子為電活性分子。

19.根據權利要求18所述的試劑盒，其中所述電活性分子選自亞甲基藍和二茂鐵。

20.根據權利要求14所述的試劑盒，其中所述核酸外切酶選自大腸桿菌核酸外切酶III、λ噬菌體核酸外切酶、和T7噬菌體基因6核酸外切酶。

21.根據權利要求14所述的試劑盒，其中所述信號產生分子為亞甲基藍，該信號產生分子連接在所述含有胸腺嘧啶的單鏈DNA的3’端部分；所述核酸外切酶為大腸桿菌核酸外切酶III。

22.根據權利要求14-21中任意一項所述的試劑盒，其中所述檢測試劑為帶負電荷的氧化銦錫玻璃電極的形式，該帶負電荷的氧化銦錫玻璃電極位于電極芯片上。