[發明專利]一種使用切向流過濾純化依諾肝素的方法

無效

• 申請號: 201410100250.2
• 申請日: 2014-03-19
• 公開（公告）號: CN103936889A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 張銳;劉向暉
• 申請（專利權）人: 蘇州英諾凱生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C08B37/10
• 分類號: C08B37/10
• 代理公司: 蘇州廣正知識產權代理有限公司 32234
• 代理人: 劉述生

技術領域

本發明涉及依諾肝素的領域，更具體地，本發明涉及一種使用切向流過濾純化依諾肝素的方法，應用于依諾肝素的純化。

背景技術

肝素鈉（Heparin）是廣泛存在于人和哺乳動物組織中的生物活性物質，屬于天然黏多糖類，其化學結構由右旋葡萄糖醛酸和右旋葡萄糖胺交替連接而成，分子量分布5,000?－?30,000?道爾頓(?平均分子量為?20,000?道爾頓)。肝素鈉是迄今為止人類已知的分子結構最復雜的有機化合物之一。肝素鈉具有很強的抗凝血、抗血栓功能，即抗Ⅱ?a?和抗Xa?功能。長期使用普通肝素鈉有誘導血小板減少癥的風險（3%），而血小板減少癥能導致血栓癥和死亡率的增加。

依諾肝素鈉（Enoxaparin?Sodium）為低分子肝素類（low?molecular?weightheparin，簡稱LMWH）品種之一，主要應用于抗血栓、抗凝血、治療急性心梗和不穩定性心絞痛等。其抗血機理復雜，適應性比較廣泛，對凝血的各個環節都有作用，擁有廣泛的市場前景。目前依諾肝素的生產主要通過肝素在堿性條件下裂解后，用有機溶劑沉淀、烘干、透析/超濾，凍干等純化手段得到藥用級依諾肝素。

與普通肝素鈉相比，“依諾肝素鈉”具有相似的抗凝效能，但是引起血小板減少的副作用明顯降低，出血并發癥亦減少、皮下注射吸收好、體內半衰期較長等諸多優點，市場占有率約占肝素類產品2/3?以上。

當前依諾肝素鈉純化手段中的透析方法存在換水量大，且不能自動操作，透析操作時間長，放大過程可操作性差，凍干過程含水量高導致能耗高等缺陷，而目前使用的普通的超濾技術處理量受限制，從實驗室階段到放大過程數據參考性不強，不能夠很好地預測小試到中試以及規模生產所需要的過程參數，從而影響了整個生產過程的質量控制。

發明內容

本發明主要解決的技術問題是提供一種使用切向流過濾純化依諾肝素的方法，在依諾肝素脫鹽濃縮除雜中的應用，使得過濾滯留體積小，產品收率高，一步實現除雜脫鹽濃縮，快速，高效溫和，縮短操作時間和可操作性，降低成本；通過實時工藝數據記錄而實現直接、簡便穩定可靠地從研發規模放大到生產規模。

為解決上述技術問題，本發明采用的一個技術方案是：提供了一種使用切向流過濾純化依諾肝素的方法，包括以下步驟：

a、預準備：將依諾肝素樣品溶解在純水中，定容后然后裝至端口處理容器中形成依諾肝素溶液，并連接緩沖液容器，滲透天平上放置液體收集器，滲透天平歸零；

b、參數設置：壓力監測器和泵通過USB接口數據線外接計算機，在計算機內通過軟件進行參數設置；

c、設置泵的流速：關閉透過液端口，斷開端口處理容器與緩沖液容器，開啟泵，通過泵從端口處理器中抽取依諾肝素溶液，通過膜上出液口的管道進入中空纖維膜組件，壓力傳感器將數據反饋給壓力監測器，依諾肝素溶液進入膜上回流液口的管道回流，通過自動背壓閥回流進入端口處理容器中；

d、濃縮階段：使用計算機開始開始采集數據，運行5分鐘后打開透過液端口，泵從端口處理容器中抽取依諾肝素溶液，通過膜上出液口的管道進入中空纖維膜組件，壓力傳感器將數據反饋給壓力監測器，依諾肝素溶液的小部分液體通過滲透口的管道滲透至液體收集器中，依諾肝素溶液的大部分液體通過膜上回流液口的管道回流進入端口處理容器中，逐步提高TMP，設置TMP來改變滲透口的管道內滲透液的流速，依諾肝素溶液進入濃縮階段，同時對低分子雜質及鹽進行脫除；

e、脫除低分子雜質和鹽：當依諾肝素溶液濃縮至一定體積后，在緩沖液容器中加入純水，由于管道系統為內封閉狀態，當緩沖液容器中滲透出液體時，端口處理容器內部形成真空，將緩沖液容器中純水吸入，依諾肝素溶液進入恒體積換液階段，實現低分子雜質和鹽的脫除，同時實現脫除低分子多糖而調節分子量分布，觀察壓力及滲透流量變化，調控TMP來改變滲透流速；

f、完成超濾：通過測定滲透液中鹽含量，確定換水倍數，當換水達到4-8倍時，依諾肝素溶液完成超濾，斷開緩沖液容器，濃縮依諾肝素至難以有液體滴出，計算機終止數據收集，保存數據，關閉泵，終止依諾肝素超濾的實驗，清洗設備；

g、指標檢測：將依諾肝素肝素樣品凍干，稱取質量，計算收率，產品指標檢測。

在本發明一個較佳實施例中，所述的滲透天平通過透過液端口與中空纖維膜組件相連接，所述的中空纖維膜組件分別與自動背壓閥和壓力監測器相連接，所述的端口處理容器連接在自動背壓閥和壓力監測器之間，所述的緩沖液容器與端口處理容器相連接，所述的計算機與壓力監測器外接，所述的液體收集器放置在滲透天平上面，所述的壓力監測器設置在泵上。