[發明專利]一種利用裂殖壺菌生產二十二碳六烯酸的方法

有效

• 申請號: 201410097063.3
• 申請日: 2014-03-17
• 公開（公告）號: CN103882072A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 余龍江;朱圓敏;陳偉;周蓬蓬;金文聞;余金龍;錢凱
• 申請（專利權）人: 武漢華士特工業生物技術開發有限公司;華中科技大學;湖北欣和生物科技有限公司
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;C12R1/645
• 代理公司: 武漢東喻專利代理事務所(普通合伙) 42224
• 代理人: 李佑宏;李歡

1.一種利用裂殖壺菌生產二十二碳六烯酸的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將裂殖壺菌種活化培養成裂殖壺菌種子液；

（2）將裂殖壺菌種子液按照體積百分比2%至4%接入發酵罐進行培養，培養溫度25攝氏度至28攝氏度，通氣并保持恒定轉速攪拌，同時流加補料，所述補料包括碳源、氮源以及甘油，維持甘油濃度在0至10.0克/升的范圍內；

（3）進入發酵穩定期后，即溶氧度不再下降后，控制發酵溫度在18攝氏度至23攝氏度之間，通氣并保持恒定轉速攪拌；

（4）當發酵液中碳源濃度低于5.0克/升時結束發酵，收集濕菌體從而得到富含二十二碳六烯酸的油脂。

2.如權利要求1所述的利用裂殖壺菌生產二十二碳六烯酸的方法，其特征在于，所述步驟（2）中流加補料是根據發酵液中碳源濃度水平分批次流加，所述碳源為葡萄糖和/或麥芽糖，所述氮源為酵母粉和/或谷氨酸鈉。

3.如權利要求2所述的利用裂殖壺菌生產二十二碳六烯酸的方法，其特征在于，所述步驟（2）分三次流加補料，每次流加補料，當發酵液中碳源濃度下降至20.0克/升至30.0克/升范圍內時開始流加，當發酵液中碳源濃度在30.0克/升至40.0克/升之間，氮源濃度在2.0克/升至4.0克/升之間，且甘油濃度在5.0克/升至10.0克/升時停止流加。

4.如權利要求1所述的利用裂殖壺菌生產二十二碳六烯酸的方法，其特征在于，所述裂殖壺菌為裂殖壺菌(Schizochytrium?sp)S056，于2013年9月29日保藏于中國典型培養物保藏中心CCTCC，保藏編號為CCTCC?M2013459。

5.如權利要求4所述的利用裂殖壺菌生產二十二碳六烯酸的方法，其特征在于，步驟（2）控制通氣量在10立方/小時至50立方/小時之間，步驟（3）控制通氣量在10立方/小時至30立方/小時之間。

6.如權利要求1所述的利用裂殖壺菌生產二十二碳六烯酸的方法，其特征在于，所述步驟（1）將裂殖壺菌種活化培養成裂殖壺菌種子液，包括以下子步驟：

（a）種子培養：

向種子培養基中接入裂殖壺菌，接種量體積百分比為1%至5%，在搖床轉速150轉/分鐘至220轉/分鐘、培養溫度22攝氏度至28攝氏度的條件下進行搖瓶培養，使裂殖壺菌菌種生長到達對數期，獲得種子液；

（b）種子擴大培養：

將步驟（a）得到的搖瓶種子液接入種子培養罐中的種子擴大培養基進行擴大培養，接種量體積百分比為1%至5%，攪拌轉速150轉/分鐘至300轉/分鐘，通氣量0.2立方/小時至15立方/小時，培養溫度22攝氏度至28攝氏度的條件下進行種子擴大培養，使裂殖壺菌菌種生長到達對數期，獲得種子擴大種子液。

7.如權利要求6所述的利用裂殖壺菌生產二十二碳六烯酸的方法，其特征在于，所述步驟（a）中的種子培養基組分：葡萄糖30.0克/升至60.0克/升，酵母粉5.0克/升至10.0克/升，蛋白胨1.0克/升至5.0克/升，硫酸鎂0.5克/升至2.0克/升，磷酸二氫鉀1.0克/升至3.0克/升。

8.如權利要求6所述的利用裂殖壺菌生產二十二碳六烯酸的方法，其特征在于，步驟（b）中種子培養罐內的種子擴大培養基組分：葡萄糖30.0克/升至60.0克/升，酵母粉5.0克/升至10.0克/升，大豆餅粉0至3.0克/升，硝酸鈉1.0克/升至2.0克/升，硫酸鎂0.5克/升至2.0克/升，磷酸二氫鉀1.0克/升至3.0克/升。

9.如權利要求6所述的利用裂殖壺菌生產二十二碳六烯酸的方法，其特征在于，步驟（a）中種子液的培養周期為20-24小時，步驟（b）中，種子擴大培養的培養周期為20-24小時。

10.甘油應用于誘導裂殖壺菌增加二十二碳六烯酸合成量。