[發明專利]一種金線蓮組織培養快速增殖方法

有效

• 申請號: 201410096819.2
• 申請日: 2014-03-17
• 公開（公告）號: CN103858762A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 石斗開;陳瑞鳳;陳秀環;賴鷺挺;賴鷺捷;陸利春
• 申請（專利權）人: 廈門涌泉科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廈門市新華專利商標代理有限公司 35203
• 代理人: 廖吉保;唐紹烈

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其是指一種金線蓮組織培養快速增殖方法。

背景技術

金線蓮（Anoectochilus?roxburghii?(Wall.)?Lindl）是蘭科開唇蘭屬的多年生草本植物，具有清熱解毒、祛風利濕、滋陰潤肺及降血壓等功效。同時，金線蓮株型小巧美觀，葉形優美，葉脈金黃色，呈網狀排列，具有極高的觀賞價值。

然而，金線蓮種子自然萌發率和繁殖率低，生長緩慢，加上人為大量采挖及生態環境的破壞，野生金線蓮資源日漸枯竭。現有技術中，通過組織培養建立無性繁殖系，對金線蓮資源進行保護和合理利用。目前，金線蓮培育主要是固體培養基實現芽誘導、增殖與壯苗，其缺陷在于：增殖倍率低，培養時間長，成本高，使得金線蓮得不到較快的發展。

金線蓮培育的另一種方法為液體培養基培育，液體培養基通過搖床淺層震蕩進行金線蓮增殖比固體增殖速度更快。液體培養能讓所有的外植體充分而均勻的吸收養分，同時能夠避免褐化物對培養物生長的影響，有鑒于此，本發明人研發出一種金線蓮組織培養快速增殖方法，本案由此產生。

發明內容

本發明的目的在于提供一種金線蓮組織培養快速增殖方法，解決金線蓮增殖率低，繁殖周期長及成本高等問題，實現金線蓮工業化快速繁育。

為達成上述目的，本發明的解決方案為：

一種金線蓮組織培養快速增殖方法，包括以下步驟：

外植體誘導：采取金線蓮植株作為外植體，先對外植體進行清洗、消毒，接入不添加激素的MS基本培養基誘導培養，前一周弱光培養，光照強度500-800Lux，一周后強光培養，光照強度1500-2000Lux，光照時間10小時/天，溫度23±2℃，培養40天；

增殖培養：接入液體培養基中進液體增殖培養，液體增殖培養基配比：MS培養基、6-BA（6-卞基嘌呤）1.4-1.6?mg/L、NAA（萘乙酸）?0.2-0.3?mg/L，培養條件為暗培養，溫度為23±2℃，培養周期45天；

壯苗培養：壯苗培養基為無激素液體改良MS培養基，光照培養，光強為1200-1500Lux，光照時間為8小時/天，溫度為23±2?℃，培養周期為12-15天；

生根培養：生根培養基配比：1/2MS、香蕉60g/L、活性炭1g/L、水解酪蛋白0.5g/L，光照培養，光照時間10?小時/天，光照強度1500-2500?Lux，溫度為23±2?℃，培養周期為3個月。

所述外植體清洗、消毒的具體步驟為：先用洗衣粉水溶液浸泡5?min（分鐘），自來水沖洗干凈；置于無菌工作臺中，75%（體積分數）的酒精消毒30s（秒），無菌水沖洗1次，再用0.1%（質量分數）的升汞（HgCl₂）消毒3min，無菌水沖洗3次，最后用10%（質量分數）的次氯酸鈉消毒6-8min，無菌水沖洗5次。

所述外植體消毒完成后，吸干水分切成1±0.1?cm的莖段，然后接入不添加激素的MS基本培養基中進行誘導培養，pH5.6-5.8。

所述增殖培養及壯苗培養均采用液體淺層震蕩培養，采用直徑80cm（厘米）、高100cm耐高溫PP組培瓶培養，培養液的量為瓶身的1/6-1/5，接種量為培養液的2/3-3/4，并置于大型工業搖床上，轉速80-100r/min。

所述增殖培養每隔15天更換一次培養液并分瓶，45天后轉入壯苗培養基中。

采用上述方案后，本發明的種金線蓮組織培養快速增殖方法解決了增殖倍率低，培養時間長及生產成本高等問題，實現金線蓮工業化快速繁育，縮短了培養周期，45天增殖倍率達25倍。

具體實施方式

運用本發明進行金線蓮組織培養的具體實施例：

一、外植體誘導培養