[發明專利]一種麥考酚酸的發酵工藝及培養基配比

在審

• 申請號: 201410095794.4
• 申請日: 2014-03-12
• 公開（公告）號: CN103834701A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發明（設計）人: 王勇;白騰飛;徐強如;李軍;郭紹定;傅立峰;蘇永明;陳軍;明國軍;伊曉楠;趙金起;馬智勇
• 申請（專利權）人: 江蘇九陽生物制藥有限公司
• 主分類號: C12P17/04
• 分類號: C12P17/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種工藝及配比，特別是一種麥考酚酸的發酵工藝及培養基配比。

背景技術

麥考酚酸是由青霉屬菌株產生的抗真菌、抗腫瘤并具免疫抑制作用的抗生素。麥考酚酸的2-乙基酯類衍生物——嗎替麥考酚酯是瑞士羅氏公司開發的第三代免疫抑制劑。10年(1995年-2005年)來，全球范圍內已有超過59.3萬例患者服用嗎替麥考酚酯。2004年9月15日的新版《國家基本醫療保險和工傷保險藥品目錄》中，器官移植中使用的主要免疫抑制劑嗎替麥考酚酯進入乙類目錄。據IMS數據分析：2009年，嗎替麥考酚酯、他克莫司、環孢素占據中國免疫抑制劑市場87％的份額。其中，嗎替麥考酚酯的市場份額高達40％。麥考酚酸作為嗎替麥考酚酯的前體化合物，研究及創新麥考酚酸的發酵工藝及培養基配比對于生產嗎替麥考酚酯的企業來說十分重要。

工業上麥考酚酸的發酵工藝采用二級種子罐培養而后移種發酵罐，發酵總周期在21天以上，時間較長且動力消耗較大。另外，采用這種發酵工藝及培養基配比，放罐所得麥考酚酸的效價不到10000ug／ml，效價不高。

發明內容

本發明的目的就是為了解決上述現有技術存在的麥考酚酸發酵時間較長、動力消耗較大、效價不高而提供的一種麥考酚酸的發酵工藝及培養基配比。

本發明的目的可以通過以下技術方案來實現：

(1)將冷凍管孢懸液接種于斜面培養基，在(23±0.5)℃下培養190小時后，取1支斜面加入無菌水，制得孢懸液；

(2)將上述制得的孢懸液按搖瓶培養基2.5％的接種量接種于裝有搖瓶培養基的種子搖瓶中，在(24±0.5)℃下培養26小時后得搖瓶種子液；

(3)將上述搖瓶種子液按種子罐培養基0.2％的接種量接種于裝有種子罐培養基的種子罐中，在(24±0.5)℃下培養42小時后得種子液；

(4)將上述種子液按發酵罐培養基9.8％的接種量移入裝有發酵罐培養基的發酵罐中，在(23±0.5)℃下培養198小時后放罐得麥考酚酸發酵液，所得麥考酚酸效價為13000～15000ug／ml；

(5)上述(1)中斜面培養基的組成及配比：葡萄糖1.5％(g／ml)、酵母浸出粉0.5％(g／ml)、麥芽浸出粉1％(g／ml)、碳酸鈣0.2％(g／ml)、瓊脂2％(g／ml)、微量元素0.1％(ml／ml)，溶劑為蒸餾水，pH值為6.8；

(6)上述(2)中搖瓶培養基的組成及配比：蔗糖2％(g／ml)、生豆粉0.95％(g／ml)、玉米漿粉0.8％(g／ml)、酵母浸出粉0.5％(g／ml)、磷酸二氫鉀0.1％(g／ml)，硫酸鎂0.1％(g／ml)，溶劑為蒸餾水，pH值為6.5；

(7)上述(3)中種子罐培養基的組成及配比：蔗糖3.5％(g／ml)、生米粉3％(g／ml)、酵母浸出粉0.96％(g／ml)、磷酸二氫鉀0.1％(g／ml)，硫酸鎂0.1％(g／ml)，溶劑為飲用水，pH值為6.5；

(8)上述(4)中發酵罐培養基的組成及配比：蔗糖2l％(g／ml)、氨基乙酸1.26％(g／ml)、甲硫氨酸0.045％(g／rnl)、磷酸二氫鉀0.6％(g／ml)、微量元素0.1％(ml／ml)，溶劑為飲用水，pH值為4.5；

(9)上述(5)和(8)中微量元素的組成及配比：FeSO₄·7H₂O3.52％(g／ml)、CuSO₄·5H₂O4.8％(g／ml)、ZnSO₄·7H₂O38.4％(g／ml)、MnSO₄·H₂O1.92％(g／ml)，溶劑為蒸餾水，pH值為自然。

本發明提供的一種麥考酚酸的發酵工藝及培養基配比，與現有技術相比，主要具有如下優點和有益成果：

(1)與現有技術麥考酚酸的發酵工藝采用二級種子罐培養使發酵總周期在21天以上相比，本發明經種子罐培養后直接進發酵罐培養得麥考酚酸發酵液，將發酵總周期縮短至19天，同時動力消耗降低30％左右；

(2)與現有技術麥考酚酸的培養基配比相比，在現有技術麥考酚酸的發酵工藝下，所得麥考酚酸的效價不到10000ug/ml，本發明采用的麥考酚酸發酵工藝及培養基配比所得麥考酚酸效價為13000～15000ug／ml；

(3)與現有技術麥考酚酸發酵工藝及培養基配比相比，本發明采用的麥考酚酸發酵工藝及培養基配比可使麥考酚酸的批產量提高20％～40％。