[發(fā)明專利]一種自體來源富血小板血漿凍干粉的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410093843.0
• 申請日: 2014-03-14
• 公開（公告）號: CN104906052B
• 公開（公告）日: 2017-09-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐劍煒;潘龍
• 申請（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院
• 主分類號: A61K9/19
• 分類號: A61K9/19;A61K35/16;A61K35/19;A61K47/36
• 代理公司: 上海卓陽知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)31262
• 代理人: 巫蓓麗

1.一種富血小板血漿凍干粉的制備方法，其特征在于，它包括以下步驟：

a)高濃度PRP的制備：將外周血在200×g下離心10min，保留上層血漿，再1390×g離心15min，保留沉淀和上層部分血漿；

b)PRP血小板部分凍干粉的制備：將步驟a)制備的PRP離心分離獲得血小板，洗滌后用含有33～37mM海藻糖的溶液36～37℃溫育3.5～4.5h，然后用凍干緩沖液重懸后放入超低溫冰箱，以-0.9～-1.1℃/min速率降溫到-75～-85℃，維持12h以上，液氮浴1h以上；再放入凍干機，升溫至-35～-38℃，真空度0.01～0.03Torr并維持140～160min后，以0.9～1.1℃/min速率上升到-8～-12℃，真空度0～0.2Torr維持140～160min，最后升溫到21～23℃，真空度0～0.2Torr至少維持24h；

c)PRP血漿部分凍干粉及氯化鈣激活PRP凍干粉的制備：將步驟a)制備的PRP離心分離獲得血漿；用氯化鈣溶液處理步驟a)制備的PRP，離心后保留上清；將所述血漿或所述上清放入超低溫冰箱，直接降溫至-75～-85℃，保持12h以上，然后液氮浴1h以上；再將所述血漿或所述上清放入凍干機，升溫至-35～-38℃，真空度0.01～0.03Torr并維持140～160min，然后溫度以0.9～1.1℃/min速率上升到-8～-12℃，真空度0～0.2Torr維持140～160min，最后升溫到21～23℃，真空度0～0.2Torr至少維持24h。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的海藻糖濃度為35mM。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，它包括以下步驟：

a)高濃度PRP的制備：將外周血在200×g下離心10min，保留上層血漿，再1390×g離心15min，保留沉淀和上層部分血漿；

b)PRP血小板部分凍干粉的制備：將步驟a)制備的PRP離心分離獲得血小板，洗滌后用含有35mM海藻糖的bufferA溶液37℃溫育4h，再用凍干緩沖液重懸后放入超低溫冰箱，以-1℃/min速率降溫到-80℃，維持12h，液氮浴1h以上；再放入凍干機，升溫至-35℃，真空度0.02Torr并維持150min，然后溫度以1℃/min速率上升到-10℃，真空度0.1Torr維持150min，最后升溫到22℃，真空度0.1Torr至少維持24h；

c)PRP血漿部分凍干粉及氯化鈣激活PRP凍干粉的制備：將步驟a)制備的PRP離心分離獲得血漿；用氯化鈣溶液處理步驟a)制備的PRP，離心后保留上清；將所述血漿或所述上清放入超低溫冰箱，直接降溫至-80℃，保持12h，液氮浴1h以上；再將所述血漿或所述上清放入凍干機，升溫至-35℃，真空度0.02Torr并維持150min，然后溫度以1℃/min速率上升到-10℃，真空度0.1Torr，維持150min，最后升溫到22℃，真空度0.1Torr，至少維持24h。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的“用氯化鈣溶液處理步驟a)制備的PRP”具體是將質(zhì)量分數(shù)10％的氯化鈣溶液與步驟a)制備的PRP混合后在21～23℃靜置1h以上。

5.一種富血小板血漿的保存方法，其特征在于，它是按照權(quán)利要求1-4任一所述的方法制備得到富血小板血漿凍干粉，然后真空密封保存。