[發明專利]一種利用高速逆流色譜分離純化制備哈巴俄苷和斬龍劍苷A的方法

有效

• 申請號: 201410093815.9
• 申請日: 2014-03-14
• 公開（公告）號: CN103880895A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 李行諾;童勝強;顏繼忠;張文強
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C07H1/08
• 分類號: C07H1/08;C07H13/04;C07H17/04;C07H15/203
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王曉普

（一）技術領域

本發明屬于天然藥物分離領域，涉及一種分離純化哈巴俄苷和斬龍劍苷A的方法，尤其涉及一種利用高速逆流色譜分離純化高純度哈巴俄苷和斬龍劍苷A的方法。

（二）背景技術

玄參為玄參科植物玄參Scrophularia?ningpoensis?Hemsl的干燥根。中醫認為玄參味甘、苦、咸，其性微寒，具有滋陰涼血、瀉火解毒等功效，一般用于熱病煩躁、發斑、夜寐不寧，自汗盜汗，喉嚨腫痛等癥，為臨床常用中藥。

現代醫學表明，玄參中含萜類、苷類、生物堿等成分，具有抗炎、抗腫瘤、保肝作用。

哈巴俄苷為環烯醚萜類物質，分子式C₂₀H₂₂O₈，淡黃色粉末，熔點189-190℃，分子結構式如下：

斬龍劍苷A為無色粉末，熔點110-112℃，分子式C₂₁H₂₈O₁₂，分子結構式如下：

現有技術一般采用普通色譜柱法、重結晶等傳統的分離方法分離植物中的有效單體，不僅費時費力、污染環境，且所有固定相對樣品有不可逆性吸附作用。高速逆流色譜（HSCCC）是近年來發展起來的一種連續的無需固體支撐物的高效、快速的液液分配色譜分離技術，具有分離量大、樣品無損失、回收率高、分離環境緩和、節約溶劑等特點，已經廣泛應用于生物、醫藥、環保等領域化學物質的制備分離和純化。

（三）發明內容：

本發明的目的是提供高速逆流色譜制備哈巴俄苷和斬龍劍苷A的方法，以克服現有技術中存在的上述問題。

本發明通過以下技術方案實現：

一種利用高速逆流色譜分離純化制備哈巴俄苷和斬龍劍苷A的方法，由粗提物的制備和粗提物的分離純化兩部分組成，其特征在于粗提物的分離純化應用高速逆流色譜來進行，具體的，所述方法包括以下步驟：

（1）將玄參藥材粉碎成粗粉，加入體積分數10%-95%的乙醇溶劑中，加熱至回流提取1-3次，提取液趁熱過濾，冷卻，濾液減壓除去溶劑，得到乙醇提取物；

（2）哈巴俄苷、斬龍劍苷A的富集：將乙醇提取物加入填充有大孔吸附樹脂的色譜柱中，用水和甲醇或乙醇的混合溶劑（優選水和乙醇的混合溶劑）梯度洗脫，收集含有哈巴俄苷、斬龍劍苷A的洗脫液，減壓除去溶劑，干燥、得到哈巴俄苷、斬龍劍苷A混合粗提物；

（3）哈巴俄苷、斬龍劍苷A的純化：將哈巴俄苷、斬龍劍苷A混合粗提物進行高速逆流色譜分離，以體積比為1-5:5-10:1-10的溶劑A、溶劑B、溶劑C組成高速逆流溶劑體系，所述溶劑A為甲醇、乙醇、正丁醇或異丁醇，所述溶劑B為乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸正丁酯，所述溶劑C為水，將所述高速逆流溶劑體系混合充分后靜置，按上下兩相分開，取上相為固定相，下相為流動相，將固定相充滿高速逆流色譜儀的多層線圈分離柱，設定高速逆流色譜儀，在500～1000r/min轉速（優選800r/min轉速）下，以0.5～5ml/min（優選2ml/min）的流速注入流動相，以波長190-380nm（優選210～254nm）的紫外檢測器檢測，當明顯有流動相流出時，取哈巴俄苷、斬龍劍苷A混合粗提物，用上相、下相體積比1：1的混合溶劑溶解后進樣，根據紫外檢測器光譜圖的峰形分別收集對應流出液，濃縮、干燥，分別制得哈巴俄苷、斬龍劍苷A。

所述步驟（1）中，乙醇溶劑的體積用量以粗粉的質量計為3～10L/kg，每次回流提取的時間為30-60min，提取次數為1-3次。

所述步驟（1）中，所述乙醇溶劑優選體積分數50%的乙醇溶劑。

所述步驟（2）中，所述大孔吸附樹脂為非極性、弱極性或中極性的大孔吸附樹脂，優選D101、AB-8、DM301等大孔吸附樹脂，更優選AB-8大孔吸附樹脂。

所述步驟（2）中，所述梯度洗脫條件為先用2-6倍柱體積的水洗脫，再用2-6倍柱體積的體積分數10%-30%乙醇或甲醇的水溶液（優選乙醇水溶液）洗脫，再用2-6倍柱體積的體積分數30%-50%乙醇或甲醇水溶液（優選乙醇水溶液）洗脫，再用2-6倍柱體積的體積分數40%-70%乙醇或甲醇水溶液（優選乙醇水溶液）洗脫，再用2-6倍柱體積的體積分數60%-95%乙醇或甲醇水溶液（優選乙醇水溶液）洗脫。

進一步，所述梯度洗脫優選為以下之一：