[發(fā)明專利]21染色體中基因檢測方法、相關(guān)檢測探針組合物及檢測試劑盒、以及相關(guān)應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410093318.9
• 申請日: 2014-03-13
• 公開（公告）號: CN103820565A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳金中;趙翊均
• 申請（專利權(quán)）人: 上海融圓生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 王潔

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及疾病相關(guān)檢測技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及21染色體中基因檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別是指一種21染色體中基因檢測方法、相關(guān)檢測探針組合物及檢測試劑盒、以及相關(guān)應(yīng)用。

背景技術(shù)

21三體綜合癥（先天愚型，Down’s?syndrome，唐氏綜合癥）是一種常見的常染色體病，其主要原因是因?yàn)?1號染色體三體化造成的嚴(yán)重遺傳物質(zhì)不平衡而導(dǎo)致智力嚴(yán)重低下（IQ50-70），特別面容（國際臉）、身體多種畸形率高和腫瘤發(fā)病率高等等系列疾病特征。S21三體綜合癥發(fā)病率在1/500左右，隨孕婦年齡增大發(fā)病率明顯增加。21三體綜合癥幾乎沒有自理生存能力，壽命與正常人類似，病人生命質(zhì)量極差，也給家庭和社會造成沉重負(fù)擔(dān)。21三體綜合癥目前尚無有效的治療辦法，預(yù)防患者出生是阻斷該病遺傳的最有效的手段，因此產(chǎn)前基因檢測是避免再次生育患者的最佳選擇。

21三體綜合癥可以參考染色體檢測結(jié)果和其他附加醫(yī)療檢測進(jìn)行判斷，。對于產(chǎn)前診斷，羊水合絨毛組織都是適合的檢測樣本。但是由于染色體檢測需要活細(xì)胞培養(yǎng)以及后續(xù)染色體顯帶分析，對樣本要求高（2ml全血或10ml羊水），檢測時(shí)間長（2周），難以廣泛開展。染色體檢測因?yàn)榧夹g(shù)條件復(fù)雜，影響因素多，即便在條件良好的試驗(yàn)室也有較多的失敗案例。隨后開發(fā)的熒光原位雜交可以不使用活細(xì)胞，直接在固定細(xì)胞操作大大簡化了檢測流程，但是探針檢測范圍局限性無法取代染色體檢測。而包括AFP檢測和孕婦血漿二代測序檢測遠(yuǎn)遠(yuǎn)無法達(dá)到染色體檢測的準(zhǔn)確度，僅僅作為發(fā)現(xiàn)高危人群的一種篩選方法。

本發(fā)明檢測21染色體中基因的方法，其采用MGB探針定量閉管檢測2個(gè)21染色體特異性單拷貝位點(diǎn)，可對少量樣本（血濾紙，0.1ml羊水，口腔拭子）進(jìn)行檢測，僅僅在2-3小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)確得出21號染色體的體性特點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的就是針對以上存在的問題與不足，提供一種21染色體中基因檢測方法、相關(guān)檢測探針組合物及檢測試劑盒、以及相關(guān)應(yīng)用，該檢測方法設(shè)計(jì)巧妙，采用閉管檢測，可有效避免樣本污染，且檢測快速、準(zhǔn)確、簡便，從而可作為醫(yī)師診斷、用藥的參考依據(jù)，適于大規(guī)模推廣應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，在本發(fā)明的第一方面，提供了一種21染色體中基因的檢測方法，其特點(diǎn)是，包括步驟：

a.提取檢測對象的基因組DNA；

b.采用第一PCR引物對和第一Taqman?MGB熒光探針對所述步驟a得到的基因組DNA進(jìn)行熒光定量PCR，其中所述第一PCR引物對是SEQ?ID?NO:4和SEQ?ID?NO:5所示的核苷酸序列，所述第一Taqman?MGB熒光探針具有的核苷酸序列是SEQ?ID?NO:6所示的核苷酸序列；采用第二PCR引物對和第二Taqman?MGB熒光探針對所述步驟a得到的基因組DNA進(jìn)行熒光定量PCR，其中所述第二PCR引物對是SEQ?ID?NO:7和SEQ?ID?NO:8所示的核苷酸序列，所述第二Taqman?MGB熒光探針具有的核苷酸序列是SEQ?ID?NO:9所示的核苷酸序列；

c.根據(jù)所述熒光定量PCR中收集的熒光信號而形成的實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線，分析所述基因組DNA中的21染色體的兩個(gè)位點(diǎn)來判斷染色體數(shù)量是否正常。

較佳地，在進(jìn)行熒光定量PCR時(shí)，還采用內(nèi)參PCR引物對和內(nèi)參Taqman?MGB熒光探針進(jìn)行擴(kuò)增，其中所述內(nèi)參PCR引物對是SEQ?ID?NO:10和SEQ?ID?NO:11所示的核苷酸序列，所述內(nèi)參Taqman?MGB熒光探針具有的核苷酸序列是SEQ?ID?NO:12所示的核苷酸序列。

在本發(fā)明的第二方面，提供了一種21染色體中基因檢測探針組合物，其特點(diǎn)是，包括第一PCR引物對、第一Taqman?MGB熒光探針、第二PCR引物對和第二Taqman?MGB熒光探針，其中所述第一PCR引物對是SEQ?ID?NO:4和SEQ?ID?NO:5所示的核苷酸序列，所述第一Taqman?MGB熒光探針具有的核苷酸序列是SEQ?ID?NO:6所示的核苷酸序列，所述第二PCR引物對是SEQ?ID?NO:7和SEQ?ID?NO:8所示的核苷酸序列，所述第二Taqman?MGB熒光探針具有的核苷酸序列是SEQ?ID?NO:9所示的核苷酸序列。