[發明專利]一種活細胞精華液產品及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201410093210.X
• 申請日: 2014-03-14
• 公開（公告）號: CN103898049B
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發明（設計）人: 陳禮明;曹振芳;楊桂娟
• 申請（專利權）人: 江蘇久騰醫學科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A61K35/28;A61K8/98;A61P17/00;A61Q19/00;A61Q19/08
• 代理公司: 北京勁創知識產權代理事務所(普通合伙) 11589
• 代理人: 張鐵蘭

1.一種活細胞精華液產品的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)人體脂肪的獲取；

2)采用含有0.025%-0.1%的IV型膠原酶和0.025%-0.125%胰酶的消化液初次消化脂肪組織，再用0.05%-0.125%胰酶-EDTA消化未消化脂肪組織，進一步獲得更多的ADSCs；

3)對所獲ADSCs用完全培養基體外培養，傳代2-5次，利用貼壁篩選方法進一步純化ADSCs，對純化后的ADSCs液氮凍存，每個凍存管1ml，ADSCs個數1×10⁷個/ml，保存為細胞種子；所述ADSCs保證在8代以內，應表達STRO-1、CD44、CD90、CD105和CD73，不表達CD34、CD133、CD14和CD45表面蛋白，這群細胞特性穩定，擴增一代和兩代后的細胞同質性分別達到95％和98％；所述ADSCs經過嚴格的細菌性和外源物質的檢驗，細菌、真菌、病毒、支原體、衣原體無污染；

4)取出凍存ADSCs，37℃1min復蘇，用PBS清洗掉凍存液后用完全培養基重懸，分兩個T175培養瓶培養；

5)去除培養瓶中的完全培養液，添加條件培養基，培養7天，收集分泌液；

6)通過超濾杯蛋白截留系統濃縮ADSCs分泌液，獲得活細胞精華液產品；

所述的條件培養基，按重量份數包括以下組分：堿性纖維細胞生長因子0.05份、表皮生長因子0.05份、DMEM/F12 95份、抗生素1份、谷氨酸鹽1份、非必需氨基酸1份、抗氧化劑1份。