[發(fā)明專利]一株蝙蝠弧菌及制備瓊膠酶的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410093180.2
• 申請(qǐng)日: 2014-03-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103865850A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張龍濤;歐洋;曾紹校;鄭寶東;張怡;黃旭輝;曾誠(chéng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N9/24;C12R1/01
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

1.一株蝙蝠弧菌，其特征在于：所述的菌株為蝙蝠弧菌（Vampirovibrio?sp.）fjfst-2013001，已于2013年12月8日在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心登記保藏，其保藏編號(hào)為CCTCC?M?2013638。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一株蝙蝠弧菌，其特征在于：所述蝙蝠弧菌的16S?rRNA的序列如SEQ?ID?NO.1所示。

3.一種如權(quán)利要求1所述的一株蝙蝠弧菌的用途，其特征在于：所述菌株用于制備瓊膠酶。

4.一種如權(quán)利要求1所述的一株蝙蝠弧菌用于制備瓊膠酶的方法，其特征在于：所述方法包括如下步驟：

（1）?用250mL錐形瓶裝20-60mL種子培養(yǎng)基，按常規(guī)方法滅菌，冷卻，并接種菌落，接種后于20-30℃，80-140rpm搖床培養(yǎng)12-24h后得到種子發(fā)酵液；

（2）?用250mL錐形瓶裝20-60mL發(fā)酵培養(yǎng)基，按常規(guī)方法滅菌，冷卻，并按2%-10%的接種量，將種子發(fā)酵液接入發(fā)酵培養(yǎng)基，20-30℃培養(yǎng)24-60h后得到含瓊膠酶的發(fā)酵液；?

（3）?而后將發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)4℃，8000-10000g冷凍離心10-20min之后，取上清液；

（4）?將上清液加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%-80%的飽和硫酸銨進(jìn)行鹽析，放置冰箱過(guò)夜后，4℃、8000-10000g離心20-40min取沉淀；

（5）?沉淀置于0.01-0.1mol/L?PBS緩沖液中溶解，而后置于透析袋中透析；

（6）?取透析后的透析液，用0.01-0.1mol/L?PBS緩沖液沖過(guò)2-3床體積后，加入5-10ml透析液進(jìn)入Q-Sepharose?Fast?Flow中，上樣平衡后，用2-3床0.01-0.1mol/L?PBS緩沖液洗去雜質(zhì)，而后用0.01-0.1mol/L?PBS緩沖液含0-2mol/L的NaCl進(jìn)行梯度洗脫，收集有瓊膠酶活性的試管，將有活性的合并，充分透析脫鹽，進(jìn)行冷凍干燥，得粗酶粉；

（7）?取粗酶粉0.1g，溶于5ml的0.01-0.1mol/L?PBS緩沖液中，待0.01-0.1mol/L?PBS緩沖液沖過(guò)4-5床體積之后，加入5ml樣液到凝膠柱Sephacryl?S-100上，并用含0.01-0.1mol/L?PBS緩沖液洗脫，測(cè)定并收集有瓊膠酶活力的試管；

（8）?將試管中的液體合并進(jìn)行冷凍干燥，即成瓊膠酶。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一株蝙蝠弧菌用于制備瓊膠酶的方法，其特征在于：所述種子培養(yǎng)基為：海水晶25g/L，蛋白胨5g/L，酵母粉1g/L，瓊脂2g/L，調(diào)節(jié)pH為7.2-8.4，去離子水配制；發(fā)酵培養(yǎng)基配方：海水晶20-30g/L，蛋白胨3-7g/L，酵母粉0.5-2.5g/L，瓊脂1.5-2.5g/L，調(diào)節(jié)pH為7.2-8.4，去離子水配制。