[發明專利]轉基因玉米MIR604結構特異定量PCR精準檢測的引物和探針及方法有效
| 申請號： | 201410092200.4 | 申請日： | 2014-03-13 |
| 公開（公告）號： | CN103937878A | 公開（公告）日： | 2014-07-23 |
| 發明（設計）人： | 常麗娟;宋君;雷紹榮;郭靈安;劉勇;王東;尹全;張富麗;劉文娟 | 申請（專利權）人： | 四川省農業科學院分析測試中心 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 成都頂峰專利事務所(普通合伙) 51224 | 代理人： | 楊俊華 |
| 地址： | 610000 四*** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 轉基因 玉米 mir604 結構 特異 定量 pcr 精準 檢測 引物 探針 方法 | ||
1.轉基因玉米MIR604結構特異性定量PCR精準檢測的引物和探針，其特征在于,
上游引物序列，MIR604ConF：5'-GACGACTTGTTTCATTGATTCTTCA-3'；
下游引物序列，MIR604ConR：5'-?GGGCCTCGGTGTTGTTGTC?-3'；
熒光探針序列，MIR604ConP：5'-FAM-ATCGAGCTTCTTTTGCACCA-TAMRA-3'。
2.轉基因玉米MIR604結構特異性定量PCR精準檢測方法，其特征在于,包括以下步驟：
（1）合成以下引物及與引物配合使用的熒光探針，
上游引物序列，MIR604ConF：5'-GACGACTTGTTTCATTGATTCTTCA-3'
下游引物序列，MIR604ConR：5'-?GGGCCTCGGTGTTGTTGTC?-3'
熒光探針序列，MIR604ConP：5'-FAM-ATCGAGCTTCTTTTGCACCA-TAMRA-3'；
（2）制備MIR604品系的DNA稀釋液；
（3）配制PCR反應體系；
（4）定量PCR檢測。
3.根據權利要求2所述的轉基因玉米MIR604結構特異性定量PCR精準檢測方法，其特征在于，步驟（1）所述合成的引物及熒光探針的濃度均為10μmol/l，步驟（2）所述制備的DNA稀釋液的濃度為50ng/μl。
4.根據權利要求3所述的轉基因玉米MIR604結構特異定量PCR精準檢測方法，其特征在于，步驟（3）所述的配制PCR反應體系，即將4μl的DNA稀釋液加入到20μl反應體系中，所述20μl的反應體系包括以下組分：
Taqman?Master?mix（2×）?????????????????10μl
上游引物?????????????????????????????????1μl
下游引物?????????????????????????????????1μl
熒光探針?????????????????????????????????0.5μl
DNA稀釋液????????????????????????????????4.0μl
水???????????????????????????????????????3.5μl。
5.根據權利要求2或4所述的轉基因玉米MIR604結構特異性定量PCR精準檢測方法，其特征在于，所述PCR反應條件為：95℃預變性10min，1個循環；95℃變性15s，59℃退火60s，45個循環。
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