[發(fā)明專利]一種連續(xù)檢測(cè)肝素的方法及其裝置

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410092144.4
• 申請(qǐng)日: 2014-03-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103808775B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-11-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 秦偉;雷佳宏;丁家旺;陳燕
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院煙臺(tái)海岸帶研究所
• 主分類號(hào): G01N27/26
• 分類號(hào): G01N27/26
• 代理公司: 沈陽(yáng)科苑專利商標(biāo)代理有限公司21002
• 代理人: 周秀梅,李穎

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及肝素檢測(cè)，具體來(lái)說(shuō)涉及一種連續(xù)、快速檢測(cè)肝素的方法及其裝置。

背景技術(shù)

在臨床中，肝素的檢測(cè)是通過(guò)測(cè)定活化凝血時(shí)間（ACT）或者活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）而間接實(shí)現(xiàn)的。血小板的數(shù)量和功能會(huì)影響ACT的準(zhǔn)確性與可靠性；APTT雖然排除了血小板的影響，但不適用于全血測(cè)定。聚離子敏感膜電極特異性強(qiáng)、靈敏度高，已被用于全血樣品中肝素的測(cè)定。然而，聚離子敏感膜電極產(chǎn)生的類穩(wěn)態(tài)電位響應(yīng)，是水相中待測(cè)聚離子在膜相中的離子交換劑協(xié)助作用下被萃取進(jìn)入膜相、并向膜本體擴(kuò)散的過(guò)程；此過(guò)程不可逆，電極無(wú)法重復(fù)使用，使其應(yīng)用受到限制。采用脈沖電流調(diào)控模式或計(jì)時(shí)電位模式，雖然能夠使電極重復(fù)使用，卻未能用于流動(dòng)分析之中，不利于連續(xù)檢測(cè)；另外，氯離子的存在也會(huì)對(duì)電極產(chǎn)生較大的干擾。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對(duì)上述不足提供一種連續(xù)、快速檢測(cè)肝素的方法及其裝置。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種連續(xù)檢測(cè)肝素的方法，將敏感膜中含有魚(yú)精蛋白的聚離子敏感膜電極置于流動(dòng)注分析系統(tǒng)中，并施加外加恒電流，當(dāng)待測(cè)樣品隨載液流入檢測(cè)池中，聚離子敏感膜中的魚(yú)精蛋白與肝素的特異性作用使電極產(chǎn)生電位信號(hào)，根據(jù)電位變化得到樣品溶液中肝素的濃度，同時(shí)外加恒電流能夠促進(jìn)魚(yú)精蛋白向聚離子敏感膜內(nèi)擴(kuò)散，使電極在線再生，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)肝素的連續(xù)檢測(cè)。

具體檢測(cè)過(guò)程：

（a）將敏感膜中含有魚(yú)精蛋白的聚離子敏感膜電極固定于檢測(cè)池中，利用電化學(xué)工作站測(cè)定聚離子敏感膜電極在外加恒電流作用下的電極電位，待電位穩(wěn)定后得到基線電位；

（b）轉(zhuǎn)換樣品閥，使肝素標(biāo)準(zhǔn)溶液隨載液流入測(cè)量池，肝素與魚(yú)精蛋白相互作用使電極敏感膜表面的魚(yú)精蛋白含量降低，同時(shí)水相中的鈉離子交換進(jìn)入膜相并占據(jù)陽(yáng)離子交換位點(diǎn)，引起電位信號(hào)變化；肝素標(biāo)準(zhǔn)溶液流出檢測(cè)池后，電極敏感膜表面的魚(yú)精蛋白在外加恒電流的作用下逐漸恢復(fù)至初始狀態(tài)，電極電位也隨之恢復(fù)，并產(chǎn)生峰形電位信號(hào)；

（c）電極電位恢復(fù)后，重復(fù)（b）過(guò)程，可對(duì)肝素進(jìn)行連續(xù)檢測(cè)；

（d）根據(jù)加入肝素標(biāo)準(zhǔn)溶液后產(chǎn)生的峰形電位信號(hào)的峰高，對(duì)肝素濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

（e）將實(shí)際樣品按照（b）所述方法通入檢測(cè)池進(jìn)行檢測(cè)，得到樣品的峰形電位信號(hào)；通過(guò)對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)工作曲線即得到實(shí)際樣品濃度。

所述外加恒電流的目的在于促進(jìn)魚(yú)精蛋白向聚離子敏感膜內(nèi)的擴(kuò)散，其大小受到所選用的膜材料及其比例和內(nèi)充液中魚(yú)精蛋白的濃度的影響。本發(fā)明所提供的檢測(cè)方法中，外加恒電流的大小為0-100A。

所述聚離子敏感膜電極由聚氯乙烯管、內(nèi)充液和插于其中的內(nèi)參比電極組成；其中，所述聚氯乙烯管底部設(shè)有聚離子敏感膜，所述內(nèi)充液為含有魚(yú)精蛋白的Tris緩沖溶液，所述內(nèi)參比電極為銀絲。

所述聚離子敏感膜電極使用前在含有魚(yú)精蛋白的Tris緩沖溶液中活化1-24h。

所述聚離子敏感膜是由聚合物基體材料、增塑劑、離子載體和親脂性鹽組成，其重量份數(shù)比為20-40:40-80:0.1-10:0.1-10。

所述聚合物基體材料為聚氯乙烯、聚丁基丙烯酸酯、聚丙烯酸丁酯、聚醚酰亞胺、橡膠或溶膠凝膠膜；增塑劑為鄰-硝基苯辛醚（o-NPOE）、二-2-乙基己基癸酯、癸二酸二丁酯或癸二酸二辛酯；離子載體為二壬基萘磺酸；親脂性鹽為四（十二烷基）-四（4-氯苯基）硼酸銨。

一種連續(xù)檢測(cè)肝素的方法的專用裝置，專用裝置流動(dòng)分析系統(tǒng)由載液池、樣品池、蠕動(dòng)泵、樣品閥、檢測(cè)池、電位測(cè)量裝置和廢液池組成；載液池與樣品閥之間設(shè)有第一蠕動(dòng)泵，樣品池與樣品閥之間設(shè)有第二蠕動(dòng)泵；樣品閥通過(guò)管路與檢測(cè)池相連，電位測(cè)量裝置插入檢測(cè)池中；檢測(cè)池通過(guò)管路與第一廢液池相連，樣品閥通過(guò)管路與第二廢液池相連。

所述樣品閥為六通閥，并設(shè)有能夠定量載入樣品溶液的定量環(huán)。所述檢測(cè)池為噴壁式流通池。

電化學(xué)工作站通過(guò)導(dǎo)線分別連接外參比電極、聚離子敏感膜電極和輔助電極，外參比電極、聚離子敏感膜電極與輔助電極插入待檢測(cè)池中；所述外參比參比電極為Ag/AgCl（3M KCl）電極，輔助電極為鉑絲電極。

作用原理：聚離子敏感膜表面的魚(yú)精蛋白與樣品溶液中的肝素結(jié)合，形成的絡(luò)合物進(jìn)入水相，同時(shí)水相中的鈉離子交換進(jìn)入敏感膜的膜相，占據(jù)陽(yáng)離子交換位點(diǎn)，可引起電位的變化；在外加恒電流的作用下，由內(nèi)充液中滲透進(jìn)入敏感膜的膜相的魚(yú)精蛋白分子可以克服在膜相中遷移速率慢的缺點(diǎn)，快速地向敏感膜表面補(bǔ)充，使電極恢復(fù)至初始狀態(tài)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)肝素的連續(xù)檢測(cè)。