[發明專利]一種脂質代謝型肥胖基因體質評估的方法

無效

• 申請號: 201410091402.7
• 申請日: 2014-03-13
• 公開（公告）號: CN103834739A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發明（設計）人: 毛丹丹;王校;傅詠南;李曉瑩;卞雪蓮
• 申請（專利權）人: 上海中優門診部有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種脂質代謝型肥胖基因體質評估方法，其特征在于，具體步驟為?

步驟1：檢測的樣品類型與采樣方法

用采樣拭在口腔中分別左右兩腮至少需要各上下刮40次以上，以保證采集到足量的細胞樣本；

步驟2：基因組DNA的抽提方法

采用硅膠吸附法抽提每一個口腔上皮細胞樣本的基因組DNA，時間為2小時－2.5小時，經電泳檢測后，用肉眼可見清晰白色條帶即可判斷獲得的DNA能進入下一步檢測；

步驟3：熒光定量PCR反應

將每一個被測者樣本分別放入4個反應孔，同時檢測4個位點，即三磷酸腺苷結合盒轉運體A1（ABCA1）rs2230806；脂蛋白脂酶（LPL）rs320；過氧化物酶體增生激活受體γ（PPARG）rs1801282；腎上腺素受體（ADRB3）rs4994，另外根據實驗需要增設不含DNA模版的NTC空白對照孔；

每一個反應孔的基因分型可以根據下表的引物和探針設計，采用TaqMan?-MGB技術，進行檢測試劑合成；

在每一個反應孔中加入試劑為熒光定量PCR反應體系，總體積為10μl，即濃度為20ng/μl?的DNA模板2μl?、1μl?10X熒光定量PCR反應緩沖液ABI?Taqman???MGB、0.1μl?25mM?d?NTP合成DNA的四種脫氧核苷酸底物、0.5μl?25mM?MgCl₂溶液、0.02μl（5units/μl）Taq?DNA聚合酶、去離子水4.98μl、4個位點分別采用不同的正向引物（20μM，0.225μl）、反向引物（20μM，0.225μl）、VIC熒光探針（10μM，0.25μl）和FAM熒光探針（10μM，0.25μl）工具進行檢測（探針、引物、序列如下）；

三磷酸腺苷結合盒轉運體A1（ABCA1）rs2230806

帶VIC熒光A型探針???CAAaGGAGAAACT

帶FAM熒光G型探針???CAAgGGAGAAACT

正向引物???AAGTCTGTGCAATGGATCAAAA

反向引物???CTCACCAGGATTGGCTTCAG

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脂蛋白脂酶（LPL）rs320

帶VIC熒光G型探針???AGCgTTTATACTA

帶FAM熒光T型探針???AGCtTTTATACTA

正向引物???CCACCCATGTGTACCCATAAA

反向引物???TTTGGTGATACAAGCAAATGAC

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過氧化物酶體增生激活受體γ（PPARG）rs1801282

帶VIC熒光C型探針???GACcCAGAAAGCG

帶FAM熒光G型探針???GACgCAGAAAGCG

正向引物???GCAAACCCCTATTCCATGCT

反向引物???TACATAAATGCCCCCACGTC

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腎上腺素受體（ADRB3）rs4994?

帶VIC熒光C型探針???GCCcGGACTCCGA

帶FAM熒光T型探針??GCCtGGACTCCGA

正向引物???ATCCAGTACCCCTTGGTTCC

反向引物???GTTTCCCTGAGGCTGTCTTG

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將反應孔和空白對照在PCR擴增儀上進行反應，先進行預熱：50℃、2分鐘，95℃、10分鐘，然后再進行60個循環的95℃、30秒，60℃、1分鐘、反應結束后取出后再放入熒光定量PCR儀上讀取樣品熒光量，得到三磷酸腺苷結合盒轉運體A1（ABCA1）rs2230806；脂蛋白脂酶（LPL）rs320；過氧化物酶體增生激活受體γ（PPARG）rs1801282；腎上腺素受體（ADRB3）rs4994四張圖;

步驟4：SNP基因型分析

將熒光定量PCR儀上顯示的最終樣本熒光信號的4個圖和一個NTC空白對照進行比較，每個位點理論上存在三種不同的信號，純VIC熒光信號、VIC和FAM雜合熒光信號以及純FAM熒光信號，分別代表該位點三種不同的基因型；

（1）、三磷酸腺苷結合盒轉運體A1（ABCA1）rs2230806

在檢測結果圖中，坐標軸左下區域為空白對照、坐標軸左上區域為AA基因型、坐標軸右上區域為AG基因型、坐標軸右下區域為GG基因型，?

（2）、脂蛋白脂酶（LPL）rs320

在檢測結果圖中，坐標軸左下區域為空白對照、坐標軸左上區域為GG基因型、坐標軸右上區域為GT基因型、坐標軸右下區域為TT基因型，?

（3）、過氧化物酶體增生激活受體γ（PPARG）rs1801282

在檢測結果圖中，坐標軸左下區域為空白對照、坐標軸左上區域為CC基因型、坐標軸中間區域為CG基因型、坐標軸右下區域為GG基因型，?

（4）、腎上腺素受體（ADRB3）rs4994

在檢測結果圖中，坐標軸左下區域為空白對照、坐標軸左上區域為CC基因型、坐標軸右上區域為CT基因型、坐標軸右下區域為TT基因型。

2.權利要求書1中的所述的四個基因的組合模式。