[發(fā)明專利]ESAT6-CFP10抗體的制備方法及其應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410091350.3
• 申請日: 2014-03-07
• 公開（公告）號: CN103833849A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張海;師長宏;趙勇;張彩勤
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;G01N33/577;G01N33/569
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1.一種ESAT6-CFP10抗體的制備方法，其特征在于，包括如下操作步驟：

S1：抗原ESAT6-CFP10對純種BALB／C小鼠進行免疫處理，無菌操作取出脾臟，制備脾細胞懸液待用；

S2：取對數(shù)生長的SP2／0骨髓瘤細胞與步驟S1中制得的脾細胞按1∶5的比例混合，加入PEG溶液，SP2／0骨髓瘤細胞與脾細胞融合形成雜交瘤細胞并采用HAT選擇培養(yǎng)液進行選擇培養(yǎng)，HAT選擇培養(yǎng)液維持7～10天后換用HT培養(yǎng)液，再維持2周，改用一般培養(yǎng)液培養(yǎng)；

S3：在步驟S2選擇培養(yǎng)期間檢測ESAT6-CFP10抗體，篩選出所需要的雜交瘤細胞，上述雜交瘤細胞接種小鼠腹腔，腹水經(jīng)純化后獲得抗ESAT6-CFP10抗體。

2.如權(quán)利要求1所述ESAT6-CFP10抗體的制備方法，其特征在于，步驟S1中利用GeneBank設(shè)計引物，以MTB基因組為模板，PCR擴增后測序、克隆至原核表達載體pQE80L中，IPTG誘導培養(yǎng)，收集菌體并按照Native?condition方法對目的蛋白ESAT6-CFP10進行親和抗原純化即可制得ESAT6-CFP10抗原。

3.如權(quán)利要求1所述ESAT6-CFP10抗體的制備方法，其特征在于，步驟S2中在選擇培養(yǎng)期間，每2～3天換一半培養(yǎng)液，雜交瘤細胞布滿孔底1／10面積時，開始檢測特異性抗體，檢測采用酶聯(lián)免疫吸附試驗進行。

4.如權(quán)利要求1制取的ESAT6-CFP10抗體的應用，其特征在于：是將ESAT6-CFP10抗體作為診斷結(jié)核病的試劑。