[發明專利]用于黃顙魚及烏鱧超雄魚及全雄魚開發的后裔測定方法

有效

• 申請號: 201410091227.1
• 申請日: 2014-03-12
• 公開（公告）號: CN103798173A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發明（設計）人: 韓林強;吳建開;江謝武;古勇明;胡重江;許治沖;李朝兵
• 申請（專利權）人: 佛山市南海百容水產良種有限公司;廣東海興農集團有限公司
• 主分類號: A01K61/00
• 分類號: A01K61/00
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 曹志霞

技術領域

本發明涉及水產動物遺傳育種領域，確切地說是指一種用于黃顙魚及烏鱧超雄魚及全雄魚開發的后裔測定方法。

背景技術

在水產養殖中，許多養殖種類雌雄個體之間的經濟性狀，如生長速度、個體大小及可食（藥用）部位大小等存在差異。因此，通過控制性別的方法生產單一性別的苗種用于養殖能夠顯著提升經濟效益。如黃顙魚或烏鱧，雄魚比雌魚生長速度要快，最終個體要大，因此養殖過程選擇全雄性或雄性比例占大多數的苗種能夠顯著增加養殖效益。

目前培育單性苗種的常規方法主要包括激素投喂法、遠緣雜交、人工雌核發育和超雄（超雌）三系配套法。激素直接投喂法即在養殖動物性別分化之前透過在餌料當中添加性激素達到控制性別的方法，該方法在很多魚類當中有效，但在蝦蟹等甲殼類當中效果不甚理想，且存在食品安全的隱患，在生產當中應用不多。遠緣雜交技術控制性別是雜技育種的一個重要利用方面，許多魚類的種間、屬間或科間雜交能夠產生單一性別或性腺敗育的后代，如用奧利亞羅非魚雄性和尼羅羅非魚雌性雜交所繁殖后代為全雄性。人工雌核發育技術即通過人為用紫外線或其它高能射線處理精子，使精子遺傳失活，使其與卵子受精后僅起到激活卵子而不參與胚胎的后續發育的技術。對于雌性配子同型的水產動物來說，誘導雌核發育能夠獲得全雌性后代，如異育銀鯽。三系配套法指對于性別決定機制為XX-XY或ZW-ZZ型的雌性異型或雄性異型動物，通過原系構建性別轉化系（即遺傳性別和生理性別相反的系），再通過轉化系和原系交配獲得遺傳純系超雄或超雌性動物，從而在生產上利用這些超雄性或超雌性動物與原系交配獲得大量全雄性或全雌性后代的育種方法。

但是在傳統的XX-XY型性別決定機制動物中，開發全雄性苗種所采用的三系配套技術當中，XY型雌性轉化系的篩選和鑒別通常采用的是XY型自然雄性個體，即XX型和XY型雌性的區分需要利用其與XY型自然雄性個體繁殖后代性別比例的不同來實現。理論上，XX型雌性和XY型雄性繁育后代雌性比例為1:1，而XY型雌性和XY雄雄性繁育后代性別比例為1:3，據此進行親本基因型的區分。但在實際育種操作過程當中，由于受到培育條件、取樣數量及魚苗培育過程伴隨的殘殺等現象的發生，造成取樣群體性別比例嚴重偏離理論比例，從而使得這種需要嚴格依據后代性別比例進行親本基因型區分的方法其判定結果存在很大的不確定性。

發明內容

針對上述缺陷，本發明解決的技術問題在于提供一種用于黃顙魚及烏鱧超雄魚及全雄魚開發的后裔測定方法，作簡單，效率高，育種風險低，克服了傳統上開發XX-XY基因型養殖動物全雄苗種的不確定性，能夠顯著提高測交效率，減少統計困難。

為了解決以上的技術問題，本發明提供的用于黃顙魚及烏鱧超雄魚及全雄魚開發的后裔測定方法，包括如下步驟：

（1）黃顙魚、烏鱧的激素控制性別：經組織學切片觀察，黃顙魚及烏鱧性別分化出現在孵化后第11-15天，在魚苗孵化后第5天開始，采用30ppm甲基睪丸酮和50ppm氟他胺或30ppm雌酮和50ppm枸櫞酸他莫昔芬處理的飼料，連續投喂30天可獲得雌性或雄性比例在90%以上的后代；

（2）測交篩選偽雄性：利用自然雌性XX個體對雄性化性逆轉的候選群體雄性進行一配一交配，隔離飼養至10cm-15cm時進行性腺壓片檢測，統計后代性別比例，其中后代全部為雌性或雄性個體比例低于5%的可判定為XX型雄魚；

（3）全雌性群體及偽雌性群體獲得：利用篩選到的偽雄性與正常雌性繁殖可獲得全雌性群體，取其中部分進行雄性化逆轉，所獲得的雄性個體全部為偽雄性；

（4）利用偽雄性測交篩選偽雌性：利用構建的大量偽雄性群體與雌性化性逆轉的候選群體雌性進行一配一交配，隔離飼養至10cm-15cm時進行性腺壓片檢測，統計后代性別比例，其中后代全部為雌性或雄性個體比例低于5%的可判定為XX型雌性魚，后代雄性率超過30%的可判定為XY型雌性魚；

（5）利用全雌性種群測交篩選YY雄性及雌性構建超雄系：利用篩選獲得偽雌性個體與正常雄性個體繁殖，后代分為兩部分，一部分正常養殖，一部分進行雌性化性逆轉；利用XX雌性與上述正常培育獲得雄性一配一交配，根據后代性別比例篩選YY雄性；利用XX雄性與上述雌性化性逆轉獲得雌性進行一配一交配，根據后代性別比例篩選獲得YY雌性。利用篩選獲得YY雄性及YY雌性交配可獲得大量YY型后代，部分繼續進行雌性化性逆轉可大量獲得YY雌性，構建成功YY繁育系，其余部分可正常用于全雄性苗種繁育。

優選地，步驟（3）中，偽雄性個體除用于全雌性群體的繁育外，還用于后續測交操作。