[發(fā)明專利]一種利用HPLC-ELSD測(cè)定啤酒中麥芽低聚糖的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410089102.5
• 申請(qǐng)日: 2014-03-12
• 公開（公告）號(hào): CN103852531A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李崎;陳熙;王金晶;劉春鳳;李永仙;鄭飛云;朱林江
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛;王玉松

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種利用HPLC-ELSD測(cè)定啤酒中麥芽低聚糖的方法，屬于化學(xué)分析檢測(cè)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

啤酒含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，被稱為“液體面包”。實(shí)際上，啤酒中含量最豐富的是糖類，它們不僅提供啤酒中絕大部分的能量，而且對(duì)啤酒泡沫性能也發(fā)揮作用。而啤酒中游離糖包括單糖，二糖和多糖。單糖和高聚糖的含量相對(duì)較少，而主要成分就是低聚糖。如何能夠定量地分析啤酒中麥芽低聚糖成為研究其功能性質(zhì)的一個(gè)難題。

麥芽低聚糖包括麥芽糖、麥芽三糖、麥芽四糖、麥芽五糖、麥芽六糖、麥芽七糖及麥芽八糖。目前對(duì)麥芽低聚糖的研究?jī)H局限于定量分析麥芽三糖及以下，而對(duì)于麥芽四糖及以上并無報(bào)道。且沒有一種有效檢測(cè)方法能定量分析麥芽糖、麥芽三糖等低聚糖。

本發(fā)明旨在提供一種同時(shí)檢測(cè)啤酒中多種麥芽低聚糖的方法，為研究啤酒釀造過程中麥芽低聚糖含量的變化對(duì)啤酒泡沫性能的影響提供幫助，同時(shí)也為生產(chǎn)工藝提供理論指導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種利用HPLC-ELSD檢測(cè)啤酒麥芽低聚糖的方法。該方法能有效對(duì)啤酒中麥芽低聚糖含量進(jìn)行分析。

所述方法的具體步驟為：

（1）樣品制備：取市售啤酒10.0mL，加入等體積的體積分?jǐn)?shù)為10%的三氟乙酸溶液并在4℃條件下放置1小時(shí)，8000轉(zhuǎn)離心10min以除去啤酒中蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)移上清液放置另一瓶中，并置于超聲儀中超聲處理60min以除去氣泡；用0.45μm有機(jī)濾膜和C18萃取小柱過濾至透明無顆粒狀態(tài)，將濾液存于樣品瓶中，準(zhǔn)備進(jìn)樣；

（2）樣品檢測(cè)：

檢測(cè)裝置為島津LC-20AB高效液相色譜儀工作站，WatersXbridgeAmide柱的規(guī)格為：長(zhǎng)度250毫米╳內(nèi)徑4.6毫米╳粒度3.5微米。

開啟ELSD檢測(cè)器，設(shè)置漂移管溫度為50℃，載氣壓力為350KPa；待所設(shè)置參數(shù)平穩(wěn)后將80%乙腈水溶液作為A流動(dòng)相，30%乙腈水溶液作為B流動(dòng)相輸入到島津LC-20AB高效液相色譜儀工作站。

采用梯度洗脫程序：0-16min，80%A-30%A；16-16.01min，30%A-80%A；16.01-30min，80%A；進(jìn)樣體積為10μL；流速1.0mL/min；柱溫35℃。

待基線平穩(wěn)后，進(jìn)入工作狀態(tài)。

將待測(cè)啤酒樣品注入進(jìn)入工作狀態(tài)的HPLC裝置的色譜柱，進(jìn)樣量為10微升，計(jì)算同一保留時(shí)間下的峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，即計(jì)算出待測(cè)啤酒樣品中麥芽低聚糖的含量。

所述標(biāo)準(zhǔn)曲線方程的繪制是稱取麥芽糖、麥芽三糖、麥芽四糖、麥芽五糖、麥芽六糖和麥芽七糖標(biāo)準(zhǔn)品，用70%乙腈水定容于容量瓶中，分別制成麥芽低聚糖含量為10、100、500、10000、20000和5000微克/毫升的溶液，分別注入進(jìn)入工作狀態(tài)的HPLC裝置的色譜柱，進(jìn)樣量為10微升，分別計(jì)算同一保留時(shí)間下的峰面積，以含量x為橫坐標(biāo)，以峰面積y為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y=f(x)，含量在10-5000微克/毫升范圍。

所述的無水乙腈和去離子水均用0.45μm有機(jī)濾膜過濾，并放置于超聲儀中超聲60min。

所述乙腈和麥芽低聚糖標(biāo)準(zhǔn)品均為市售色譜純。

本發(fā)明的檢測(cè)方法中麥芽低聚糖的含量在10-5000微克/毫升的范圍內(nèi)與同一保留時(shí)間下的峰面積成線性關(guān)系，可利用這一規(guī)律對(duì)麥芽低聚糖的含量進(jìn)行檢測(cè)，且本發(fā)明采用HPLC-ELSD，即高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器相結(jié)合，靈敏度高，檢測(cè)快速，且不受流動(dòng)相組成的干擾，因此對(duì)麥芽低聚糖檢測(cè)的效果好。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例中所使用的麥芽低聚糖標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜圖，按洗脫時(shí)間從前往后，對(duì)應(yīng)的洗脫峰依次是麥芽糖、麥芽三糖、麥芽四糖、麥芽五糖、麥芽六糖及麥芽七糖。

圖2為啤酒樣品的高效液相色譜圖；1，麥芽糖；2，麥芽三糖；3，麥芽四糖；4，麥芽五糖；5，麥芽六糖；6，麥芽七糖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1測(cè)定啤酒中麥芽低聚糖含量

（1）樣品制備：取市售啤酒10.0mL，加入同體積的10%（v/v）的三氟乙酸溶液并在4℃條件下放置1小時(shí)，8000轉(zhuǎn)離心10min，取上清液放置另一新瓶中并置于超聲儀中超聲60min；用0.45μm有機(jī)濾膜和C18萃取小柱過濾，存于樣品瓶中，準(zhǔn)備進(jìn)樣。

（2）設(shè)置檢測(cè)裝置：