[發(fā)明專(zhuān)利]豬偽狂犬病毒gE、gB和gD抗體的膠體金免疫層析檢測(cè)試紙及制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410089066.2
• 申請(qǐng)日: 2014-03-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103792373A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 廖園園;漆世華;秦偉;朱薇;劉潔;孫慶歌;鄭良益;謝紅玲;溫文生;馮釗
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 武漢中博生物股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 代理公司: 武漢科皓知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 張火春

?

技術(shù)領(lǐng)域

????本發(fā)明涉及一種檢測(cè)試紙及制備方法，具體涉及一種豬偽狂犬病毒gE、gB和gD抗體的膠體金免疫層析檢測(cè)試紙及制備方法。

背景技術(shù)

偽狂犬病（Pseudorabies）是由偽狂犬病毒（Pseudorabies?virus，PRV）引起的包括多種家畜和野生動(dòng)物共患的一種急性傳染病。豬是偽狂犬病最主要的貯存宿主和傳染源。健康豬與病豬、帶毒豬直接接觸可感染本病。成年豬常為隱性感染；受感染的懷孕母豬則出現(xiàn)流產(chǎn)、死胎、弱胎和木乃伊胎等病征；受感染的新生仔豬出現(xiàn)發(fā)熱及神經(jīng)癥狀，甚至衰竭死亡，死亡率可達(dá)100%。

自1902年首次在美國(guó)發(fā)現(xiàn)偽狂犬病以來(lái)，該病己在全球范圍內(nèi)流行。我國(guó)自1947年首次發(fā)現(xiàn)偽狂犬病以來(lái)，至2006年已有31個(gè)省（區(qū)）、市有關(guān)于偽狂犬病的報(bào)道。偽狂犬病對(duì)我國(guó)乃至全球養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，成為嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的重大傳染病之一。

在PRV與宿主的相互作用中，病毒的gB和gD囊膜糖蛋白起著重要作用。病毒囊膜糖蛋白gB和gD不僅介導(dǎo)病毒對(duì)靶細(xì)胞的感染，也是被感染的宿主免疫系統(tǒng)識(shí)別的主要抗原。在皰疹病毒中g(shù)B蛋白屬于最保守的糖蛋白之一，該糖蛋白能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生高滴度的中和抗體，且是病毒感染過(guò)程中的必須成分。PRV?gD為病毒感染必需的結(jié)構(gòu)蛋白，該蛋白參與病毒的穿透過(guò)程，是一種重要的中和抗原，也是保護(hù)性抗體的主要目標(biāo)。研究表明，gD基因是預(yù)防豬偽狂犬病重組腺病毒疫苗和核酸疫苗的重要靶序列，可以作為血清學(xué)診斷抗原。gE糖蛋白是PRV的一種十分重要的糖蛋白，在決定病毒的毒力及神經(jīng)嗜性等方面起著重要作用，但gE不是PRV增殖所必需的蛋白，常作為缺失的候選基因。

目前，常用的檢測(cè)PRV的方法包括乳膠凝集（LAT）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）等。膠體金免疫層析法作為一種日漸成熟的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方法，以其特異性強(qiáng)、成本低，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果可靠、可單份或成批測(cè)定、不需任何儀器等優(yōu)點(diǎn)已被廣泛接受。目前已有報(bào)道的PRV檢測(cè)試紙多只能檢測(cè)針對(duì)單一蛋白抗原（gE）的抗體，測(cè)試者往往需要借助二次檢測(cè)才能進(jìn)一步確定在沒(méi)有野毒感染的情況下，是否存在PRV抗體。

?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的首要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，提供一種豬偽狂犬病毒gE、gB和gD抗體的膠體金免疫層析檢測(cè)試紙。該試紙采用膠體金標(biāo)記的小鼠抗豬IgG單抗做探針，包被豬偽狂犬病毒gE、gB和gD蛋白抗原和羊抗小鼠IgG抗體進(jìn)行抗豬偽狂犬病毒gE、gB和gD抗體的檢測(cè)。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述豬偽狂犬病毒gE、gB和gD抗體的膠體金免疫層析檢測(cè)試紙的制備方法。

本發(fā)明的再一目的在于提供上述豬偽狂犬病毒gE、gB和gD抗體的膠體金免疫層析檢測(cè)試紙的使用方法。

本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種豬偽狂犬病毒gE、gB和gD抗體的膠體金免疫層析檢測(cè)試紙，包括樣品吸收區(qū)、金標(biāo)探針區(qū)、固相化抗原和抗體區(qū)、吸水區(qū)和支撐板，樣品吸收區(qū)、金標(biāo)探針區(qū)、固相化抗原抗體區(qū)和吸水區(qū)鋪設(shè)在支撐板上并依次相互部分重疊；所述的金標(biāo)探針區(qū)包被金標(biāo)探針，為膠體金標(biāo)記的小鼠抗豬IgG單抗，標(biāo)記量?jī)?yōu)選為每mL膠體金標(biāo)記5～20μg小鼠抗豬IgG單抗，金標(biāo)探針包被量?jī)?yōu)選為5～10μL；所述的固相化抗原和抗體區(qū)（自金標(biāo)探針區(qū)至吸水區(qū)方向）依次有檢測(cè)線T1、T2、T3和對(duì)照線C；所述的檢測(cè)線T1包被有豬偽狂犬病毒gE蛋白，包被量?jī)?yōu)選為0.5～5μg；檢測(cè)線T2包被有豬偽狂犬病毒gB蛋白，包被量?jī)?yōu)選為0.5～5μg；檢測(cè)線T3包被有豬偽狂犬病毒gD蛋白，包被量?jī)?yōu)選為0.5～5μg；對(duì)照線C包被有羊抗小鼠IgG抗體，包被量?jī)?yōu)選為為1～10μg。

所述的支撐板的材料優(yōu)選為粘有一層聚氯乙烯襯膜的聚乙烯板；所述的樣品吸收區(qū)的材料優(yōu)選為玻璃纖維膜；所述的金標(biāo)探針區(qū)的材料優(yōu)選為聚酯膜；所述的固相化抗原和抗體區(qū)的材料優(yōu)選為硝酸纖維素膜；所述的吸水區(qū)的材料優(yōu)選為吸水濾紙。

所述的豬偽狂犬病毒gE、gB和gD蛋白抗原可按照常規(guī)的基因工程方法進(jìn)行制備或表達(dá)，這些都是本領(lǐng)域技術(shù)人員所能掌握或通曉的。