[發明專利]一種同時測定酒花中七種黃酮類物質的方法

無效

• 申請號: 201410089061.X
• 申請日: 2014-03-12
• 公開（公告）號: CN103852552A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發明（設計）人: 劉春鳳;李佳;李崎;王金晶;李永仙;鄭飛云
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛;王玉松

技術領域

本發明涉及一種同時檢測酒花中七種黃酮類物質的方法，尤其是一種采用反相高效液相色譜同時檢測酒花中黃腐酚、異黃腐酚等七種黃酮類物質的方法，屬于化學分析檢測領域。

背景技術

酒花同釀造用水、麥芽、酵母并稱為啤酒釀造的四大原料。相比之下，盡管酒花在啤酒中的添加量很少，但其對于啤酒最終的品質卻有著很大的影響，主要體現在改善啤酒風味、提高啤酒的非生物穩定性、提高營養價值三個方面。

相關研究顯示，與添加酒花的啤酒相比，未添加酒花的啤酒帶有明顯的不愉快麥芽風味，同時甜味、乙醇味過于濃厚，整體感官風味質量較差。更值得關注的是，酒花是很多天然產物的重要來源，黃酮即為其中重要的一種。黃酮隸屬于植物多酚物質，具有重要的抗氧化性和金屬螯合性質，藥理學和生物學特性顯著，對提高啤酒的非生物穩定性和營養價值方面有著很大的研究意義和價值。除酒花外，水果、蔬菜、茶葉、可可粉等也是黃酮類物質的重要來源，至今，已有4000種黃酮類物質被發現和鑒定，但是研究表明，酒花是目前發現的天然含異戊二烯基黃酮的唯一來源。在人類的飲食中，主要通過飲用啤酒來攝取這類黃酮物質。

為進一步研究酒花中的黃酮類物質，首先要建立準確的含量檢測方法。酒花中的重要功能成分，例如苦味酸、單酚等已經建立了較為成熟的液相檢測方法，而對于多種黃酮類物質的同時檢測，并沒有高效且精確的方法。因此為便于監測啤酒的發酵過程，通過該類黃酮物質的含量來考察啤酒的抗氧化功效及營養價值，急需建立高效精確的液相檢測方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種同時檢測酒花中七種黃酮類物質的方法，尤其是一種采用反相高效液相色譜同時檢測酒花中黃腐酚、異黃腐酚等七種黃酮類物質的方法。

所述七種黃酮類物質是黃腐酚、異黃腐酚、6-異戊二烯基黃酮、8-異戊二烯基黃酮、六甲氧基黃酮、山奈酚3-O-蕓香糖苷和槲皮素。

所述方法包括如下步驟：

a.酒花樣品制備：酒花顆粒樣品經粉碎磨成粉末狀后，精確稱量1g酒花粉末加入7mL無水乙醚搖動15min后超聲波5min，1500×g離心10min，去除上清液，再加入20mL50%（v/v）甲醇溶液搖動15min后超聲60min，1500×g離心10min，上清液經0.45μm微孔濾膜過濾，存于樣品瓶中準備進樣。

b.標樣制備：精確稱取黃酮標準品0.0010g用色譜級甲醇充分溶解，定容到10mL，按照需要稀釋成不同濃度，充分混勻，用0.45μm有機濾膜過濾，冷凍保存備用，準備進樣。

c.色譜條件如下：

色譜柱：ZorbaxEclipseXDB-C18（4.6×250mm，5m）；

流動相：有機B相為乙腈；無機A相為含有甲酸0.1%（v/v）的水溶液；

進樣體積10μL，流速0.8mL/min，柱溫30℃；

檢測波長：280nm及370nm；

采用梯度洗脫方法，洗脫程序為：0-20min，25%B-80%B；20-25min，80%B-100%B；25-28min，100%B-100%B；28-30min，100%B-25%B。

本發明提供的檢測方法可將酒花中的黃腐酚、異黃腐酚、6-異戊二烯基黃酮、8-異戊二烯基黃酮、六甲氧基黃酮、山奈酚3-O-蕓香糖苷和槲皮素這7種物質一次性分離開，操作簡單、準確可靠，節省時間。此外，由于黃酮類物質種類繁多、在酒花中含量較低，本方法相比其他黃酮檢測方法，對七種化合物都能獲得較好的分離效果。

附圖說明

圖1是黃酮標準樣品色譜圖；1，山奈酚3-O蕓香糖苷；2，槲皮素；3，異黃腐酚；4，六甲氧基黃酮；5，8-異戊二烯基黃酮；6，6-異戊二烯基黃酮；7，黃腐酚。

圖2是酒花顆粒樣品色譜圖；1，山奈酚3-O蕓香糖苷；2，槲皮素；3，異黃腐酚；4，六甲氧基黃酮；5，8-異戊二烯基黃酮；6，6-異戊二烯基黃酮；7，黃腐酚。

具體實施方式

實施例17種黃酮類物質的標樣檢測

精確稱取黃酮標準品0.0010g用色譜級甲醇充分溶解，定容到10mL，按照需要稀釋成不同濃度，準備進樣存于樣品瓶中，進樣分析。

反相液相色譜分析條件：

色譜柱：Zorbax?Eclipse?XDB-C18（4.6×250mm，5m）；

進樣體積10μL，流速0.8mL/min，柱溫30℃；

檢測波長：280nm及370nm；