[發明專利]一種腫瘤特異抗原表位多肽負載的樹突狀細胞疫苗制備方法及其試劑盒

有效

• 申請號: 201410087842.5
• 申請日: 2014-03-12
• 公開（公告）號: CN103800897B
• 公開（公告）日: 2017-03-22
• 發明（設計）人: 金光瑞;王琳
• 申請（專利權）人: 李金珍
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61K47/42;A61K45/00;A61P35/00;A61P35/04
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1.一種腫瘤特異抗原表位多肽負載的樹突狀細胞疫苗制備方法，其特征在于，所述方法包括采用鑒定的腫瘤特異表達的上皮細胞粘附分子的人白細胞抗原A201陽性表位多肽，即SEQ?ID?NO.1-6中任一項所示的氨基酸序列組成的多肽，負載樹突狀細胞，可引發特異性的靶向抗腫瘤的細胞毒性T淋巴細胞反應。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述樹突狀細胞疫苗由SEQ?ID?NO.1-6中一項以上抗原表位多肽負載的樹突狀細胞。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述樹突狀細胞疫苗，優選地由SEQ?ID?NO.1-6中三項以上抗原表位多肽組合物負載。

4.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述樹突狀細胞通過以下方法獲取：

通過血細胞分離機單采腫瘤患者2-4升外周血并經淋巴細胞分離液純化得到單個核細胞；細胞計數儀計數后單個核細胞用AIM-V培養基稀釋到3-5×10⁶，加入75cm²培養瓶中貼壁；

在37℃、5％CO₂培養箱中孵育90min后，未貼壁細胞洗滌收集下來，用于激活毒性T淋巴細胞之用；貼壁細胞加入完全AIM-V培養基誘導培養，含有5％的自體血清、1000IU／mL重組人粒細胞巨噬集落刺激因子和500IU／mL重組人干擾素α；

培養到第四天收獲未成熟樹突狀細胞(DCs)；成熟DCs采用完全AIM-V培養基再誘導到第五天得到，含5％的自體血清、1000IU／mL重組人粒細胞巨噬集落刺激因子和500IU／mL重組人干擾素α。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述抗原多肽負載DCs通過以下方法獲取：

培養到第四天，3×10⁶個未成熟DCs用上皮細胞粘附分子蛋白SEQ?ID?NO.1-6中一項以上抗原表位多肽組合物在37℃、5％CO₂培養箱中負載2-4小時；全AIM-V培養基誘導培養到第五天，成熟的抗原多肽負載DCs通過離心收獲得到；所得DCs經生理鹽水洗滌3次，后重懸到生理鹽水中，至濃度為5×10⁶成熟DC／mL，并添加終濃度為質量體積比1％的人血白蛋白，從而制備成抗原多肽負載的DC疫苗。

6.一種制備腫瘤特異抗原表位多肽負載的樹突狀細胞疫苗的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：

1)樹突狀細胞基礎培養基；

2)上皮細胞粘附分子SEQ?ID?NO.1-6中一項以上抗原表位多肽；

3)重組人巨粒細胞-噬細胞集落刺激因子；

4)重組人干擾素α；以及

5)使用說明書；

其中，所述使用說明書包括權利要求1-3所述的方法。

7.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒，優選地包括SEQ?ID?NO.1-6中三項以上抗原表位多肽組合物。

8.一種根據權利要求1-7中任一項所述的樹突狀細胞疫苗在制備治療腫瘤藥物中的應用。