[發明專利]一種源于桔青霉的青霉烯醇B2的抗腫瘤新用途

有效

• 申請號: 201410084653.2
• 申請日: 2014-03-10
• 公開（公告）號: CN103865807A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 陳立;周彤;宮美維;張其清
• 申請（專利權）人: 福州大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C07D207/02;C12P17/10;A61K31/4015;A61P35/00;C12R1/80
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發明涉及一種源于桔青霉的生物堿類化合物青霉烯醇B2的抗腫瘤新用途。

背景技術

生物堿是一類由生物次級代謝產生的含氮有機化合物，自然界中的生物堿種類較多，大多來源于植物，因此又有植物堿之稱。生物堿對人和動物有重要的生理作用，包括平喘鎮咳、降血糖、降血脂、抗菌、抗腫瘤、鎮痛等，其中以抗菌、抗腫瘤活性最為突出。天然結構生物堿是創新藥物研究中發現先導化合物的重要來源，目前應用于臨床的生物堿藥物已經近百種。研究發現，一些海洋真菌能夠在次級代謝過程中產生結構新穎、活性好的生物堿，具有很好的藥用和產業化前景。

本發明人研究得知，桔青霉（Penicillium?citrinum）IBPT-5?(已于2013年12月25日保藏在中國典型培養物保藏中心，地址:?武漢?武漢大學，保藏編號是：CCTCC?NO：M?2013713)?的發酵產物的粗提取物有很好的細胞增殖抑制活性，遂對其活性成分進行研究。研究發現所示生物堿類化合物具有抗腫瘤活性，目前尚未見該化合物對人結腸癌細胞SW620、人肝癌細胞Huh7、人胃癌細胞SGC-7901、人胃癌細胞BGC-823、人結腸癌細胞SW480、人食管鱗癌細胞KYSE450、人食管癌細胞EC9706、人高轉移肺癌細胞95-D、人肝癌細胞PLC、人胃癌細胞HGC-27、人淋巴癌細胞RAJI增殖抑制活性的報道，因此市場上也尚未見有與此相關的藥物。

發明內容

本發明的目的在于提供一種源于桔青霉的生物堿類化合物青霉烯醇B2的抗腫瘤新用途。

本發明首先涉及到一株桔青霉（Penicillium?citrinum）IBPT-5，該菌株已于2013年12月25日保藏在中國典型培養物保藏中心，地址:?武漢?武漢大學，保藏編號是：CCTCC?NO：M?2013713。

所述菌株的用途在于，將桔青霉（Penicillium?citrinum.）IBPT-5進行發酵培養，發酵液提取物經分離得到具有腫瘤細胞增殖抑制活性的化合物。

該化合物結構式為：

。

該化合物的制備方法，具體步驟如下：

（1）發酵生產

培養微生物的常規方法，取桔青霉（Penicillium?citrinum）IBPT-5，該菌株已于2013年12月25日保藏在中國典型培養物保藏中心，地址:?武漢?武漢大學，保藏編號是：CCTCC?NO：M?2013713，按培養微生物的常規方法，接種到PDA固體斜面培養基上在28℃培養箱中培養4天，然后接種到培養液中，28℃靜止培養30天后，獲得菌絲體和發酵液；所述培養液組成：每升水含甘露醇20.0g、酵母膏3.0?g、麥芽糖20.0?g、味精10.0?g、葡萄糖10.0?g、KH₂PO₄?0.5?g、MgSO₄?0.3?g、NaCl?30.0?g；

（2）浸膏的獲得

?用紗布將菌絲體和發酵液分離，將發酵液用2倍體積的乙酸乙酯萃取兩次，萃取液減壓蒸餾至干，得到發酵液的乙酸乙酯浸膏；

（3）化合物的分離精制?

乙酸乙酯浸膏通過100-200目硅膠拌樣后，以石油醚、二氯甲烷、甲醇為洗脫液用減壓硅膠色譜柱梯度洗脫，取二氯甲烷：甲醇v/v=100:1的洗脫物，進一步以二氯甲烷、甲醇為洗脫液，通過加壓硅膠柱層析梯度洗脫，得到二氯甲烷：甲醇v/v=50:1的洗脫物，繼續以甲醇：水v/v=3:2為溶劑進行反相硅膠柱層析除去雜質，最后通過半制備液相色譜1010型ODS-A、10×250?mm、5μm：分離流速為5?mL/min，流動相為80%甲醇含0.1%?TFA，得到t_R?15.1?min的所述化合物。

本發明保護了所述的化合物在制備腫瘤細胞增殖抑制藥物中的用途，及該化合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。腫瘤細胞包括：人結腸癌細胞SW620、人肝癌細胞Huh7、人胃癌細胞SGC-7901、人胃癌細胞BGC-823、人結腸癌細胞SW480、人食管鱗癌細胞KYSE450、人食管癌細胞EC9706、人高轉移肺癌細胞95-D、人肝癌細胞PLC、人胃癌細胞HGC-27、人淋巴癌細胞RAJI。