[發(fā)明專利]一種水稻轉(zhuǎn)錄因子在改良水稻高產(chǎn)性狀中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410083584.3
• 申請日: 2014-03-09
• 公開（公告）號: CN103820480A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邊鳴鏑;左澤乘;周婷婷;石武良;姜文洙;周連霞;都興林;楊振明;陳正道;關(guān)可興
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué)
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/84;C12N15/11;C07K19/00;A01H5/00
• 代理公司: 吉林長春新紀(jì)元專利代理有限責(zé)任公司 22100
• 代理人: 魏征驥

1.一種水稻轉(zhuǎn)錄因子在改良水稻高產(chǎn)性狀中的應(yīng)用，其特征在于所述水稻轉(zhuǎn)錄因子Os01g60960.1的核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示，其編碼蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?No.2所示。

2.一種用于改良水稻高產(chǎn)性狀的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白（VP16）₄-Linker-Os01g60960.1，其中，Linker由39個柔性氨基酸串聯(lián)而成；其序列如SEQ?ID?No.9所示，其核苷酸序列如SEQ?ID?No.3所示。

3.如權(quán)利要求2所述的一種用于改良水稻高產(chǎn)性狀的融合蛋白，其特征在于，所述VP16為來自單純皰疹病毒的VP16蛋白；VP16的氨基酸序列如SEQ?ID?No.10所示，核苷酸序列如SEQ?ID?No.4所示。

4.含有編碼權(quán)利要求2所述融合蛋白的基因的載體，其特征在于，所述載體nVP64-hyg-asRED的全序列如SEQ?ID?No.5所示。

5.如權(quán)利要求4所述載體的構(gòu)建方法如下：

（1）在植物轉(zhuǎn)錄因子數(shù)據(jù)庫中找到Os01g60960.1基因，根據(jù)其序列設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增引物對，其為正向引物F：5'-CAAAAAAGCAGGCTTCATGTCCACAGAGAGGGAAAGAC-3'和反向引物R：5'-CAAGAAAGCTGGGTCACCAAAGTATGCAGCATGCTC-3'；

（2）以野生日本晴水稻總cDNA為模板，進(jìn)行PCR獲得Os01g60960.1全序列；

（3）將PCR產(chǎn)物克隆到連接pDONER克隆載體上，經(jīng)測序鑒定得到與目的基因完全相同的序列；

（4）以雙元表達(dá)載體左右邊界包含的序列為骨架序列，通過體外重組，將ubi?promoter-VP64-Gateway表達(dá)單元、35S?promoter-asRED表達(dá)單元和35Spromoter-hyg表達(dá)單元與之融合構(gòu)建，得到載體nVP64-hyg-asRED的核苷酸序列如SEQ?ID?No.5所示；

（5）通過LR反應(yīng)將Os01g60960.1構(gòu)建到其目地基因的N端融合了VP64標(biāo)簽的植物表達(dá)載體nVP64-hyg-asRED上，獲得載體ubi：VP64-Os01g60960.1，載體核苷酸序列如SEQ?ID?No.6所示。

6.一種轉(zhuǎn)基因水稻植株的構(gòu)建方法，其特征在于，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法，將載體nVP64-hyg-asRED轉(zhuǎn)入水稻愈傷組織中，用含誘導(dǎo)劑和農(nóng)桿菌的AAM轉(zhuǎn)化液進(jìn)行轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化后的材料經(jīng)過共培養(yǎng)、篩選、分化、生根、轉(zhuǎn)基因苗的鍛煉和移栽，篩選轉(zhuǎn)基因水稻植株。

7.一種用于擴(kuò)增水稻轉(zhuǎn)錄因子Os01g60960.1基因的引物對，其特征在于：其為正向引物F：5'-CAAAAAAGCAGGCTTCATGTCCACAGAGAGGGAAAGAC-3'和反向引物R：5'-CAAGAAAGCTGGGTCACCAAAGTATGCAGCATGCTC-3'。