[發明專利]一種豬流行性腹瀉病毒及其應用

有效

• 申請號: 201410083257.8
• 申請日: 2014-03-07
• 公開（公告）號: CN103820399A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 陶曉珊;劉蕾;韓乃君;申洪銀;鄒桂榮;鄒敏;胡瀟;范根成;孫健
• 申請（專利權）人: 青島易邦生物工程有限公司
• 主分類號: C12N7/04
• 分類號: C12N7/04;C07K16/10;A61K39/215;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明屬于獸用生物制品領域，具體涉及一種豬流行性腹瀉病毒及其應用。

背景技術

豬流行性腹瀉(Porcine?epidemic?diarrhea，PED)是由豬流行性腹瀉病毒引起的豬的一種高度接觸性腸道傳染病，以嘔吐、腹瀉和食欲下降為基本特征，本病對不同年齡的豬均易感，尤其哺乳仔豬危害最嚴重，是一種高度接觸性傳染病。該病于1971年首發于英國，20世紀80年代初我國陸續發生本病。近幾年，全國豬流行性腹瀉呈爆發流行，給養殖業造成了巨大的經濟損失。該病感染目前還沒有有效的治療方法，主要是以疫苗免疫預防為主。目前，國外主要是韓國的弱毒苗，國內主要是哈獸研研制的豬傳染性胃腸炎、流行性腹瀉滅活疫苗等，但臨床應用效果較差。因此，有必要篩選出低毒，且保持高免疫原性的豬流行性腹瀉病毒來制備疫苗。

發明內容

本發明的目的是提供一種豬流行性腹瀉病毒及其應用，即一種弱毒性，且免疫原性好的豬流行性腹瀉病毒，從而彌補現有技術的不足。

本發明的豬流行性腹瀉病毒SD10株（豬流行性腹瀉病毒Porcine?Epidemic?Diarrhea?Virus）,于2013年11月08日保藏于北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為：CGMCC?No.8503。

本發明的SD10株用于制備預防豬流行性腹瀉的疫苗；

本發明的SD10株還用于制備抗體。

與現有的病毒比較，本發明所篩選的豬流行性腹瀉病毒SD10株毒性低，免疫原性好，制成的疫苗免疫后抗體產生快，產生的抗體滴度高且維持時間長，保存期長，免疫劑量小，在配種前進行免疫注射可使懷孕母豬所產仔豬獲得較好的被動免疫，使仔豬產生堅強的免疫力，能夠抵抗強毒的攻擊，提高仔豬的存活率。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明的病毒株進行詳細的描述。

實施例1：豬流行性腹瀉病毒SD10株的篩選

1.1豬流行性腹瀉病毒SD10株的分離和鑒定在進行流行病學調查時，從山東萊西某豬場送檢的腹瀉豬小腸內容物中分離到一株豬流行性腹瀉病毒（命名為SD10A1株），豬流行性腹瀉病毒RT-PCR檢測陽性，盲傳至第8代出現細胞病變，第16代出現規律、穩定的細胞病變，病毒含量≥10^5.0TCID₅₀/0.1ml，能夠被抗豬流行性腹瀉病毒特異性血清中和，傳至第121代時，傳代的病毒對3～5日齡健康未吃初乳仔豬安全，純凈，無細菌、霉菌、支原體和外源病毒（豬瘟、豬細小病毒、牛病毒性腹瀉病毒、豬繁殖與呼吸綜合癥、豬口蹄疫病毒）污染。將最終傳代分離的SD10株（豬流行性腹瀉病毒Porcine?Epidemic?Diarrhea?Virus）進行保藏，于2013年11月08日保藏于北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為：CGMCC?No.8503。

1.2本毒株接種母豬后，母豬未見流產、早產等不良反應，所產仔豬未有腹瀉發生。

1.3本發明毒株的病毒含量≥10^5.0TCID₅₀/0.1ml。

1.4本發明毒株安全性好，對3～5日齡健康未吃初乳仔豬安全。

1.5本發明毒株病毒液與凍干保護劑混合，經冷凍真空干燥制備的疫苗，免疫母豬后，所產仔豬能夠100%抵抗強毒的攻擊。

1.6克隆SD10株的ORF3基因,其全長為675bp,編碼有224個氨基酸。通過在NCBI中進行blastn分析，結果分離的ORF3基因與已報道的豬流行性腹瀉病毒的ORF3基因都存在3-5個氨基酸的差別。表明本發明所分離的SD10株與已有的豬流行性腹瀉病毒都存在遺傳上的差異，為一新的病毒株。

二、用篩選的SD10株制備疫苗

1.1疫苗的制備

1.2按照常規方法制備Vero細胞(Vero細胞購自美國ATCC)，生長液為含8%新生牛血清的MEM，培養細胞長成單層時接種SD10株病毒；

1.3取SD10株毒種（≥10^5.0TCID₅₀/0.1ml）按1%接種長勢良好的Vero細胞單層，置37℃吸附1.5小時，加含2%新生牛血清MEM維持液繼續培養；

1.4接毒后，每日觀察2次，記錄細胞病變情況，細胞病變達75%以上時收獲，反復凍融3次；