[發明專利]人源化抗人表皮生長因子受體抗體及其應用

有效

• 申請號: 201410083224.3
• 申請日: 2014-03-07
• 公開（公告）號: CN104059148A
• 公開（公告）日: 2014-09-24
• 發明（設計）人: 孫樂
• 申請（專利權）人: 回而生醫藥科技（北京）有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;C12N15/70;A61K39/395;A61P35/00;A61P31/00;A61P37/02;G01N33/68
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明涉及治療用人源基因工程抗體的制備及應用，主要是涉及特異性針對人表皮生長因子受體（epidemic growth factor receptor，EGFR）的抗體及其應用。

背景技術

表皮生長因子受體（EGFR）是表皮生長因子基因（erbB）家族的一員，在多種腫瘤如乳腺癌，結腸癌，頭頸腫瘤，腎癌，肺癌，胰腺癌，前列腺癌的發展中均具有重要影響。國內外許多研究表明，針對EGFR的抗體可有效地在胞外通過阻斷配體的結合來實現對EGFR信號轉導途徑的抑制，對多種由EGFR過度表達或/和突變所引起的人體腫瘤有較好的療效。表皮生長因子受體是目前研究得較深入且倍受關注的腫瘤治療靶點之一，應用基因工程手段研制抗EGFR的單克隆抗體，是目前腫瘤治療的研究熱點。

EGFR分子是廣泛分布于人腫瘤細胞表面的膜抗原，在細胞內信息傳遞過程中起著重要的作用。使用人源抗體或人源化抗體是克服人抗鼠源抗體反應((HAMA反應)的兩種可能的方法。由于特異性強、親和力高的人源抗體不易得到，目前主要采取鼠源單克隆抗體人源化的方法。2005年美國ImClone生產的EGFR單克隆抗體Erbitux在美國上市，在和化療一起用的時候可以延長直腸癌病人的生命。由古巴和中國百泰合作的治療鼻咽癌的泰欣生單抗也是針對EGFR同一靶點，于2009年上市。

目前已經上市的Erbitux單抗藥就是人源化的鼠抗EGFR單抗，但是本發明的單抗LA22針對的是EGFR完全不同位點，抑瘤機理與Erbitux不同，與Erbitux同時使用可以提高療效。更主要的是它結合到腫瘤細胞表面的EGFR后，能夠迅速地誘導腫瘤細胞表面的EGFR內吞，成為非常理想的生物靶向治療抗體。

發明內容

本發明的第一個目的在于提供一種人源化抗EGFR抗體。

本發明的第二個目的在于提供編碼上述抗體的基因。

本發明的第三個目的在于提供上述抗體在制備治療高表達/過度表達EGFR的惡性腫瘤和自身免疫性疾病藥物中的應用。

本發明提供的人源化抗人EGFR單克隆抗體，其輕鏈恒定區、重鏈恒定區分別為人全抗體免疫球蛋白IgG1的輕鏈恒定區、重鏈恒定區；其輕鏈可變區、重鏈可變區分別為人源化改造的EGFR鼠源單抗LA22的輕鏈可變區和重鏈可變區，所述EGFR鼠源單抗LA22的輕鏈可變區氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，重鏈可變區氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的人源化改造在可變區的FR區進行。

在本發明的一個實施例中，將EGFR鼠源單抗LA22重鏈恒定區和輕鏈恒定區分別用人IgG1的重鏈恒定區和輕鏈恒定區取代，通過將EGFR鼠源單抗LA22重鏈、輕鏈可變區的框架區FR的人源化改造，獲得具有良好生物活性和抗原親和力的人源化抗人EGFR單克隆抗體。

本發明提供的人源化抗人EGFR單克隆抗體，其人源化改造的輕鏈可變區含有如SEQ ID NO.12～14所示的任一個氨基酸序列，重鏈可變區含有如SEQ ID NO.7～11所示的任一個氨基酸序列。

進一步地，其人源化改造的輕鏈可變區含有如SEQ ID NO.14所示的氨基酸序列，重鏈可變區含有SEQ ID NO.7～11所示的氨基酸序列的任一個。

進一步地，其人源化改造的輕鏈可變區含有如SEQ ID NO.12～14所示的氨基酸序列任一個，重鏈可變區含有如SEQ IDNO.10所示的氨基酸序列。

更進一步地，其人源化改造的輕鏈可變區含有如SEQ ID NO.14所示的氨基酸序列（即輕鏈h2），重鏈可變區含有如SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列（即重鏈H3）。

本發明提供了編碼上述抗體的基因。編碼上述抗體的基因中，編碼輕鏈可變區的基因其核苷酸序列為如SEQ ID NO.20～22任一所示的DNA序列；編碼重鏈可變區的基因其核苷酸序列為如SEQ ID NO.15～19任一所示的DNA序列。

優選地，編碼輕鏈可變區的基因其核苷酸序列為如SEQ ID NO.22所示的DNA序列；編碼重鏈可變區的基因其核苷酸序列為如SEQ ID NO.18所示的DNA序列。

本發明提供了含有上述基因的表達載體。

含有所述表達載體的宿主菌、宿主細胞或表達盒在本發明保護范圍內。

本發明提供了上述人源化抗EGFR單克隆抗體在制備以EGFR為靶標的疾病治療藥物中的應用。