[發明專利]一種螢光假單胞菌及其應用

有效

• 申請號: 201410083050.0
• 申請日: 2014-03-07
• 公開（公告）號: CN103820369A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 卜光明
• 申請（專利權）人: 浙江瑞邦藥業有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P17/16;C12R1/39
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 朱水平;沈利

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，具體涉及一種螢光假單胞菌及其應用。

背景技術

假單胞菌酸A，又稱為莫匹羅星，化學名稱為9-｛4-【5-2，3-環氧-5-羥基-4-甲基已基】-3，4-二羥基四氫吡喃-2-基｝-3-甲基丁-2-烯酰氧｝壬酸，結構式如式I所示。它于1971年從假單胞菌發酵培養物分離得到的一種具有抗菌活性的化合物。

假單胞菌酸A作用在細菌體內的異亮氨酸—tRNA合成酶與異亮氨酸的結合點上，從而阻礙氨基酸的合成，消耗了細胞內的tRNA，使RNA的合成及蛋白質的合成過程中止，從而抑制細菌的生長。假單胞菌酸A對革蘭氏陽性菌，比如金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌具有很強的抗菌活性。對一些革蘭氏陰性菌，如流感嗜血桿菌，淋球菌等也有效。由于假單胞菌酸A對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的治療顯示出了獨特的療效，具有重要的臨床應用前景。

雖然假單胞菌酸A是可以利用液體發酵培養假單胞菌（Pseudomonas?sp.）來的生產的，但目前假單胞菌酸A發酵生產水平較低，而且假單胞菌的培養過程除了會產生主產物假單胞菌酸A外，還有產生大量的結構類如假單胞菌酸B、C、D組份，導致假單胞菌酸A生產成本昂貴。為了降低生產成本，有必要對現有的產生菌進行改造，提高菌種的生產水平。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于針對目前假單胞菌酸A的生產菌生產假單胞菌酸A的發酵水平較低的缺陷，提供一種具有非常高的假單胞菌酸A發酵單位的假單胞菌酸A的生產菌及其應用。

本發明解決上述技術問題的技術方案如下：

本發明的技術方案之一是：一種螢光假單胞菌(Pseudomonas?fluorescens)，其保藏編號為CGMCC?No.7147。

本發明的螢光假單胞菌CGMCC?No.7147的培養方法包括以下步驟：將種子液接種于發酵培養基中，25-30℃，pH5.0-6.0發酵培養。其中，所述的發酵培養基的最適的碳源為：葡萄糖，甘油。最適的氮碳源為蛋白胨，酵母提取物、黃豆餅粉、（NH₄）₂SO₄等。發酵的溫度為4-37℃，優選20-30℃，更優選28℃。pH為5.0-6.0，優選pH5.5。

本發明的技術方案之二是：一種如式I所示的假單胞菌酸A的制備方法，包括以下步驟：將螢光假單胞菌(Pseudomonas?fluorescens)CGMCC?No.7147發酵，從發酵液中獲得如式I所示的假單胞菌酸A，

其中，所述發酵的培養條件是常規的螢光假單胞菌的培養條件，優選4-37℃培養96-120小時。發酵溫度可以是4-37℃，優選20-30℃，更優選28℃。pH優選5.0-6.0，更優選pH5.5。發酵培養優選搖瓶培養或者發酵罐培養。

所述發酵的培養基是常規的螢光假單胞菌的培養基，優選LB培養基或者是以克每升（g/L）計組分如下的培養基：甘油50，黃豆餅粉10，蛋白胨10，(NH₄)₂SO₄5，MgSO₄3，K₂PO₄2，pH7.0-7.2。

所述的發酵接種的種子液是常規的，較佳的經過了1-2級的種子培養所得到的種子液。種子液的接種量優選1-2%（v/v）。

其中，所述的種子液是常規的，優選是經過如下種子培養獲得的種子液，所述的種子培養包括將斜面培養的菌體接種于種子培養基中，28℃培養20小時。所述的種子培養基優選以克每升（g/L）計組分如下的培養基：葡萄糖10，蛋白胨10，酵母提取物5，NaCl1，pH7.0-7.2。

所述的斜面培養是常規的，優選的包括將菌種接種于斜面培養基上，30℃培養培養3天。所述的斜面固體培養基優選以克每升（g/L）計組分如下的培養基：蛋白胨10，酵母提取物5，NaCl1，瓊脂20，pH7.0-7.2。

在符合本領域常識的基礎上，上述各優選條件，可任意組合，即得本發明各較佳實例。

本發明所用試劑和原料均市售可得。