[發(fā)明專利]一種用于預(yù)防治療番鴨細(xì)小病毒病的卵黃抗體

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410083016.3
• 申請(qǐng)日: 2014-03-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103833848A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宮曉;徐保娟;宋新宇;李陸梅;胡瀟;張維;王龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島易邦生物工程有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/08
• 分類號(hào): C07K16/08;C07K16/02;A61P31/20
• 代理公司: 北京科億知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于獸用生物制品領(lǐng)域，具體涉及一種用于預(yù)防治療番鴨細(xì)小病毒病的卵黃抗體。

背景技術(shù)

番鴨細(xì)小病毒病是侵害雛番鴨的一種急性或亞急性傳染病，它具有高度傳染性，發(fā)病率和死亡率都很高，常造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，主要發(fā)生于1～3周齡的雛番鴨，尤其是10日齡左右的雛番鴨，3周齡以上基本不發(fā)病。雛番鴨以喘氣、腹瀉及胰臟壞死和出血為主要特征的傳染病。本病最早于20世紀(jì)80年代中后期出現(xiàn)于中國(guó)福建和法國(guó)西部Brittany地區(qū)，20世紀(jì)90年代初才認(rèn)識(shí)到它是不同于小鵝瘟的獨(dú)立疾病，死亡率高達(dá)80%。對(duì)死亡的番鴨如果處理不當(dāng)，往往造成病毒的蔓延，產(chǎn)生更大的危害，目前市場(chǎng)上有預(yù)防該病的活疫苗，但而尚無(wú)快速有效的藥物或方法來(lái)防治番鴨細(xì)小病毒病。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種用于預(yù)防治療番鴨細(xì)小病毒病的卵黃抗體，提供的卵黃抗體具有效價(jià)高、保護(hù)率高、安全性好等優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明所提供的用于預(yù)防治療番鴨細(xì)小病毒病的卵黃抗體，是用保藏編號(hào)為CGMCC?No.8504的番鴨細(xì)小病毒作為抗原制備的。

該保藏編號(hào)為CGMCC?No.8504的番鴨細(xì)小病毒，為YBMDV株，已于2013年11月08日保藏于北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所的中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。

本發(fā)明的卵黃抗體，其制備包括如下的步驟

1）用番鴨細(xì)小病毒作為抗原，制成滅活疫苗；

2)將制備的滅活疫苗注射免疫產(chǎn)蛋雞，來(lái)獲得用番鴨細(xì)小病毒免疫后的雞蛋；

3）將免疫后的雞蛋收集卵黃用酸化水-辛酸的方法萃提、滅活制成卵黃抗體。

本發(fā)明用番鴨細(xì)小病毒YBMDP株接種番鴨胚，分別收獲死亡胚胚體和胚液，經(jīng)研磨、凍融后收取病毒液，經(jīng)超濾濃縮、甲醛溶液滅活后，加油佐劑混合乳化制成疫苗。用此疫苗接種產(chǎn)蛋雞，收獲雞蛋，分離蛋黃，滅活、萃提精制得到抗體。制備的抗體能預(yù)防番鴨細(xì)小病毒引起的雛鴨細(xì)小病毒感染，此卵黃抗體具有高效、安全性好、保護(hù)率高等優(yōu)點(diǎn)。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明使用的抗原為番鴨細(xì)小病毒YBMDP株，其信息如下:

一、YBMDV株的篩選

2011年從浙江省某鴨場(chǎng)爆發(fā)了急性的番鴨細(xì)小病毒病，取病死鴨的胰臟及腸道，將胰臟及腸道組織用無(wú)生理鹽水勻漿制成20%懸液，3000r/min離心15min，取上清除菌后經(jīng)尿囊腔分別接種13日齡番鴨胚，孵化120小時(shí)，收集尿囊液及胚體組織，經(jīng)勻漿后，反復(fù)凍融3次，取上清液凍存。收獲的病毒液經(jīng)純化后進(jìn)行了病毒含量、免疫原性、特異性及純凈性等方面的病毒特性的分析檢測(cè)，結(jié)果表明該毒株病毒含量為10^5.7ELD₅₀/0.2ml,最小免疫劑量為10^2.0ELD₅₀/0.2ml，該病毒僅與番鴨細(xì)小病毒發(fā)生特異性反應(yīng)，無(wú)細(xì)菌、支原體及外源病毒污染，適合作為制苗用毒株。將篩選的病毒株于2013年11月08日保藏于北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所的中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC?No.8504。

對(duì)于本發(fā)明篩選的毒株的性狀進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明，該株病毒屬細(xì)小病毒，圓形無(wú)囊膜，直徑在20μｍ左右、對(duì)乙醚、胰蛋白酶、酸不敏感，對(duì)紅細(xì)胞無(wú)凝集現(xiàn)象。該病毒可引起雛番鴨發(fā)生以出血性腸炎為特征的急性敗血性傳染病。該毒株制備的疫苗免疫成年番鴨后，能保護(hù)免疫4個(gè)月內(nèi)種番鴨所產(chǎn)子代免受流行毒株的攻擊。該毒株作100倍稀釋后，與等量雛番鴨細(xì)小病毒病抗血清中和，接種13日齡番鴨胚，結(jié)果表明，中和組番鴨胚全部健活，而病毒對(duì)照組番鴨胚全部死亡。

對(duì)篩選的YBMDV株的結(jié)構(gòu)基因VP進(jìn)行測(cè)序,結(jié)果VP全長(zhǎng)為2199bp，編碼732個(gè)氨基酸；NCBI的blast序列分析表明，YBMDV株的結(jié)構(gòu)基因VP與已公開(kāi)的番鴨細(xì)小病毒的VP存在差異位點(diǎn)，同源性為97.7％～98.3％（即存在著9-16個(gè)氨基酸的差異）。

實(shí)施例1