[發明專利]肌萎縮側索硬化癥的基因診斷試劑盒

有效

• 申請號: 201410082951.8
• 申請日: 2014-03-10
• 公開（公告）號: CN103898211A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 陳實;黎寒
• 申請（專利權）人: 江蘇雄鳴醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 李紀昌;曹翠珍

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技術領域

????發明涉及一種遺傳性疾病的基因診斷試劑盒，更具體的說是一種肌萎縮側索硬化癥的基因診斷試劑盒，屬于分子生物學技術領域。

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背景技術

肌萎縮側索硬化癥（amyotrophic?lateral?sclerosis,ALS）是運動神經元病（motor?neuron?disease,?MND）的一個主要類型，由Charcot在1865年第一次描述。其病變主要累及脊髓前角細胞，腦干運動神經核及錐體束，表現為上.下運動神經元同時受損的特征，屬于慢性進行性變性疾病。患者臨床表現為上下運動神經元同時受累的癥狀.受累肢體肌無力.肌萎縮.肌束震顫.痙攣.腱反射活躍.出現病理反射。延髓上運動神經元受累可出現痙攣性構音障礙，表現為言語緩慢.吃力.失真，并常伴有鼻音，下頜反射呈陽性;?延髓下運動神經元受累主要表現為舌肌無力萎縮.纖顫，發音無力和吞咽障礙。該病每年發病率約為2~3/10⁵,?多為中.?老年起病，男性多于女性,?多數患者在出現臨床癥狀后3~5年內死于呼吸肌麻痹，給患者和家庭帶來沉重的生理和心理負擔。

ALS起病隱匿，疾病早期臨床癥狀不典型，該病的診斷尚存在一定困難。目前國內外臨床上一直使用的為1998年世界神經病學聯盟推薦的ALS診斷標準。2001年，中華醫學會神經病學分會參照世界神經病學聯盟的診斷標準提出了我國肌萎縮側索硬化癥的診斷標準，必須有以下神經癥狀和體征：（1）下運動神經元病孫特征（包括目前臨床表現正常，肌肉的肌電圖異常）；（2）上運動神經元病損體征；（3）病情逐步發展。根據以上3個特征，又做以下3個程度的診斷：（1）確診ALS：全身四個區域（腦.頸.胸.腰骶神經支配區）的肌肉群，3個區域有上下運動神經元病損的癥狀和體征；（2）擬診ALS：在2個區域有上下運動神經元病損的癥狀和體征；（3）可能ALS：在一個區域有上下運動神經元病損的癥狀和體征，或在2~3個區域有上運動神經元病損癥狀和體征。根據情況選擇適當的輔助檢查以排除其他疾病，如肌電圖，包括運動和感覺神經傳導速度和阻滯測定及胸鎖乳突肌檢查，脊髓和腦干MRI檢查和肌肉活檢。

根據這些診斷標準，典型的ALS診斷并不困難，但是用于臨床工作，這一標準顯得過于嚴格。ALS患者發病早期可以表現為單純下運動神經元或上運動神經元受累，也可以單純表現為延髓受累癥狀，當病情發展至符合該確診標準時往往延誤了最佳治療時機。甚至約有25%的ALS患者死亡后仍然不能得到診斷，一些不典型的病例也不能得到及時得到診斷，尤其對ALS的臨床實驗中的患者的篩選非常不利。同時由于ALS神經病變部位的隨機性，ALS的臨床表現也因人而異，因病變部位而不同，其癥狀和體征也難以與一些重要疾病鑒別，如椎管源性脊髓病.?多灶性運動神經病，進行性脊肌萎縮癥，青年良性遠端手肌萎縮癥等，單憑臨床癥狀極易誤診。

迄今為止，ALS的病因及發病機制尚不明確，可能是多種因素共同作用的結果，其中環境和遺傳因素被認為是主要病因，尤其是遺傳因素。近年來，隨著分子生物學的飛速發展，已發現了多個基因與ALS發病有關，包括SOD1、FUS、VAPB、ANG、TARDBP.FIG4、OPTN、VCP、Sigmar1、CHMP2B、PFN1，并在離體和在體實驗中驗證了基因突變與發病密切相關。至今報道的各致病基因突變也有多種，如SOD1基因已報道了100多個不同的突變類型，TARDBP基因突變位點達到50多個，這些突變包括錯義突變.缺失,無義突變等,分布于各個外顯子。ALS疾病具有明顯的遺傳異質性，不同種族和家系各種原發致病位點分布情況也不一樣。

針對肌萎縮側索硬化癥的早期臨床診斷較難，且存在一定的誤診和漏診，利用基因診斷技術將成為確診的有力手段，不僅可以對患者所患疾病做出判斷，也可以對表型正常但攜帶某種特定疾病基因或者特定疾病的易感性做出判斷。聚合酶鏈式反應(polymerase?chain?reaction?,簡稱PCR技術)是近年發展起來體外擴增特異DNA片段的技術，由于其具有快速.靈敏.特異性強等特點，所以該技術很快用于實踐中。

傳統的等位基因特異性PCR簡便快速等優點，但一次PCR只能鑒別一個突變位點。從中國專利在內的有關資料檢索表明，以PCR為基礎發展起來的RT-PCR結合現在發展起來的基因測序技術，單管可以同時檢測到ALS疾病一個致病基因內所有外顯子的多個突變，目前尚未見到這一技術進行ALS疾病分子診斷的專利和報道。本項專利即是利用RT-PCR結合基因測序技術，對ALS各相關致病基因蛋白編碼區域（CDS）的所有致病突變位點進行檢測，從而對ALS做出快速診斷。

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