[發明專利]一種用陰離子交換樹脂純化制備達肝素鈉的方法

有效

• 申請號: 201410081573.1
• 申請日: 2014-03-07
• 公開（公告）號: CN104072635A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發明（設計）人: 丁建文;張華;管惠娟;宋志新;張超
• 申請（專利權）人: 常山生化藥業（江蘇）有限公司
• 主分類號: C08B37/10
• 分類號: C08B37/10
• 代理公司: 常州佰業騰飛專利代理事務所(普通合伙) 32231
• 代理人: 黃杭飛

技術領域

本發明涉及一種用陰離子交換樹脂純化制備的方法，特別涉及一種用陰離子交換樹脂純化制備達肝素鈉的方法，屬生物醫藥領域。

背景技術

達肝素鈉是低分子量肝素的一種，用作治療急性深靜脈血栓；血液透析和血液過濾期間防止在體外循環系統中發生凝血；不穩定型冠狀動脈疾病；預防與手術有關的血栓形成等。

歐洲藥典和英國藥典對低分子量肝素的定義是：一類以未分級肝素為起始物料經過分級或降解而得到的具有較低分子量的低分子量肝素。英國藥典BP從1993年版的1994年增補本中開始收載低分子量肝素，其中對低分子量肝素總則要求：重均分子量在8000以下，小于8000的級分不少于60%；抗Xa因子與抗IIa因子活性比不小于1.5。由于低分子量肝素的制備方法有多種，不同來源和方法制得的產品其末端結構、分子量及其分布、抗Ⅹa因子活性、抗Ⅱa因子活性、抗Ⅹa因子與抗Ⅱa因子活性比及藥理作用等均有差異。

我國已上市的低分子肝素沒有分級，基本上只能滿足兩個條件，重均分子量小于8000和抗Ⅹa因子活性應不低于70IU/mg、抗Ⅹa因子與抗Ⅱa因子活性比應不低于1.5，這將不利于臨床安全用藥。因此，將用陰離子交換樹脂純化制備達肝素鈉，使產品收率、純度和質量明顯提高，降低臨床用藥風險，對臨床治療的有效性和安全性帶來巨大意義。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術存在的缺陷，提供一種用陰離子交換樹脂純化制備達肝素鈉的方法，能夠明顯提高產品收率、純度和質量，降低臨床用藥風險。

實現本發明目的的技術方案是：一種用陰離子交換樹脂純化制備達肝素鈉的方法；包括如下步驟：

（1）將陰離子交換樹脂進行裝柱，然后采用堿性混合液對樹脂進行再生；

（2）再生后，先采用純化水對樹脂清洗，然后用氯化鈉溶液平衡樹脂；

（3）將達肝素鈉粗品溶于純化水中，上樣，再用氯化鈉溶液進行沖洗，去除粗品中雜質及多余小分子；

（4）采用氯化鈉溶液對步驟（3）中的中間產品進行洗脫；

（5）洗脫完畢后，采用純化水沖洗層析柱；

（6）洗脫液用乙醇沉淀，減壓干燥得到符合質量標準的達肝素鈉原料藥。

上述技術方案，所述步驟（1）中堿性混合液為氫氧化鈉和氯化鈉混合液，所述氫氧化鈉濃度為0.1mol/L～0.5mol/L，氯化鈉濃度為1mol/L～3mol/L。

上述技術方案，步驟（2）中純化水沖洗陰離子交換樹脂至流出液pH＜8，再用0.04mol/L～0.06mol/L氯化鈉溶液沖洗平衡至流出液pH＜8，所述氯化鈉溶液PH值為7～7.5。

上述技術方案，所述步驟（3）中達肝素鈉溶于純化水后形成的溶液濃度為1%，上樣時采用蠕動泵將上述達肝素鈉溶液打入樹脂柱中，并采用濃度為0.04mol/L～0.06mol/L、PH值為7～7.5的氯化鈉溶液平衡2柱體積；最后用濃度為0.08mol/L、PH值為7～7.5的氯化鈉溶液沖洗至紫外檢測儀數字歸零。

上述技術方案，所述步驟（4）中洗脫所用的氯化鈉溶液濃度為0.6mol/L～1mol/L，PH值為7～7.5。

上述技術方案，所述堿性混合液中氫氧化鈉濃度為0.3mol/L，氯化鈉濃度為2mol/L。

上述技術方案，所述步驟（2）和步驟（3）中沖洗平衡用氯化鈉溶液濃度均為0.05mol/L。

上述技術方案，所述步驟（5）洗脫完畢后，采用2柱體積純化水沖洗層析柱。

本發明制備過程中所用各種溶液的濃度及PH值都對產品具有很大影響，經過實驗得出如下結論：

（一）陰離子交換樹脂柱平衡液氯化鈉濃度及pH值的選擇：

考察上樣后，用平衡液平衡時氯化鈉濃度、平衡液pH值對產品質量的影響。實驗結果表明，在所考察的因素中，氯化鈉濃度和溶液pH值對產品質量有較大影響。濃度過小，不易使未吸附的樣品沖洗出來；濃度過大，將使已吸附好的樣品被洗掉。pH值偏酸或偏堿均影響樹脂的吸附力。

（二）沖洗液氯化鈉濃度與pH值的選擇：

考察對解聚好的達肝素鈉中雜質及多余小分子的沖洗過程中氯化鈉濃度和pH值對產品質量的影響。實驗結果表明，沖洗液濃度過小，導致產品中小分子偏多，分子量與分子量分布不符合達肝素鈉標準要求；沖洗液濃度過高，導致產品中小分子偏少，分子量與分子量分布不符合達肝素鈉標準要求。沖洗液pH值偏酸或偏堿，導致樹脂吸附能力改變，沖洗條件隨之改變。

（三）洗脫液氯化鈉濃度與pH值的選擇：