[發(fā)明專利]納米熒光微粒用作多重PCR產(chǎn)物的液相蛋白芯片的用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410081160.3
• 申請(qǐng)日: 2014-03-07
• 公開（公告）號(hào): CN103852582A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 彭年才;李超;李明;苗保剛;李紅東;倪曉龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州天隆生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N21/64
• 代理公司: 蘇州慧通知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32239
• 代理人: 安紀(jì)平

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及液相蛋白芯片領(lǐng)域，尤其是涉及一種納米熒光微粒用作多重PCR產(chǎn)物的液相蛋白芯片的用途。

背景技術(shù)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)是無需使用活生物體而酶促復(fù)制DNA的分子生物學(xué)技術(shù)。PCR在醫(yī)學(xué)和生物研究實(shí)驗(yàn)室中普遍用于多種任務(wù)，例如檢測遺傳疾病、鑒定基因指紋、診斷感染性疾病、克隆基因、親子鑒定和DNA計(jì)算。由于其無與倫比的擴(kuò)增和準(zhǔn)確性能力，分子生物學(xué)家已將PCR作為核酸檢測的首選方法。通常在PCR反應(yīng)的終點(diǎn)或平臺(tái)期進(jìn)行DNA檢測，這使得難于定量起始模板。實(shí)時(shí)PCR或動(dòng)態(tài)PCR通過隨著反應(yīng)進(jìn)程而記錄擴(kuò)增子濃度而提高了終點(diǎn)PCR分析的性能。擴(kuò)增子濃度最常通過與被擴(kuò)增靶標(biāo)相關(guān)的熒光信號(hào)變化來記錄。

液相芯片，也稱為微粒體懸浮芯片(suspension?array，liquid?chip)，是基于xMAP(flexible?Multi?Analyte?Profiling)技術(shù)的新型生物芯片技術(shù)平臺(tái)，它是在不同熒光編碼的微粒上進(jìn)行抗原-抗體、酶-底物、配體-受體的結(jié)合反應(yīng)及核酸雜交反應(yīng)，通過紅、綠兩束激光分別檢測微粒編碼和報(bào)告熒光來達(dá)到定性和定量的目的，一個(gè)反應(yīng)孔內(nèi)可以完成多達(dá)100種不同的生物學(xué)反應(yīng)，是一種新的高通量分子檢測技術(shù)平臺(tái)。但是由于現(xiàn)有編碼微粒熒光易漂白的影響，使得編碼微粒不穩(wěn)定，影響檢測結(jié)果。近年來，有學(xué)者采用量子點(diǎn)編碼微粒，但由于量子點(diǎn)發(fā)射熒光范圍有限，編碼技術(shù)不成熟等問題，也一直沒有得到廣泛應(yīng)用。

因此，現(xiàn)階段，缺乏一種高效地、高通量的蛋白檢測方法和相應(yīng)的生物芯片，這大大限制了蛋白質(zhì)組學(xué)的研究進(jìn)展。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種納米熒光微粒用作多重PCR產(chǎn)物的液相蛋白芯片的用途，采用本發(fā)明的納米熒光微粒和靶向探針相結(jié)合，使之適用于多重PCR產(chǎn)物的液相蛋白芯片檢測。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提出如下技術(shù)方案：一種納米熒光微粒用作多重PCR產(chǎn)物的液相蛋白芯片的用途，所述納米熒光微粒具有包括內(nèi)核與外殼的核殼結(jié)構(gòu)，粒徑為300～600nm，所述內(nèi)核為包含有熒光分子的聚合物微粒，所述外殼具有修飾在所述聚合物微粒外表面上的一種或多種官能團(tuán)，所述聚合物微粒為聚甲基丙烯酸甲酯的微?；蚣谆┧峒柞ヅc其它單體共聚形成的共聚物的微?；騼烧叩幕旌衔铮渲屑谆┧峒柞サ闹亓恐辽僬妓黾{米熒光微?？傊亓康?0％，所述的熒光分子的重量占所述納米熒光微粒總重量的0.05％～5％，所述納米熒光微粒用于多重PCR產(chǎn)物的液相蛋白芯片檢測。

優(yōu)選地，所述納米熒光微粒與靶向探針偶聯(lián)用于多重PCR產(chǎn)物的液相蛋白芯片檢測。

更進(jìn)一步地，所述甲基丙烯酸甲酯與其它單體共聚形成的共聚物中，甲基丙烯酸甲酯與所述其它單體的結(jié)構(gòu)單元數(shù)均大于等于50。

所述其它單體為選自氟乙烯、氯乙烯、溴乙烯、乙烯碘化、苯乙烯以及丙烯酸中的一種或多種。

所述官能團(tuán)為選自羧基，乙醇胺基，羥基，胺基，氨基，亞胺基，環(huán)氧基，異氰酸酯基，金屬醇鹽及聚乙二醇基中的一種。

所述熒光分子為羅丹明、熒光素及其衍生物、腎上腺素染料及氟硼瑩中的一種或多種。

所述熒光分子的重量優(yōu)選為所述納米熒光微?？傊亓康?.05％～5％，可表達(dá)不同強(qiáng)度的熒光，適用于編碼熒光微粒。

優(yōu)選地，所述納米熒光微粒的粒徑為350～400nm，所述納米熒光微粒的粒徑最優(yōu)為370～390nm。

所述納米熒光微粒還包含一種或者一種以上的通過所述官能團(tuán)共價(jià)連接而覆蓋在所述微粒表面的生物活性物種，該所述的生物活性物種選自抗體、抗原、核酸、配體、受體、人工多肽、蛋白質(zhì)以及多糖中的一種，所述的生物活性物種能夠參與特異性識(shí)別和結(jié)合反應(yīng)。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

1、本發(fā)明的每個(gè)納米熒光微粒上都能夠被連接上大量的熒光分子，是非常好的熒光信號(hào)放大的載體，應(yīng)用于多重PCR的液相蛋白芯片檢測中，可以大大提高檢測靈敏度，且納米熒光微粒非常穩(wěn)定，受外界影響小，熒光穩(wěn)定，這為通過熒光進(jìn)行定量檢測提供了良好的條件，因此，本發(fā)明納米熒光微粒是熒光檢測技術(shù)中高靈敏度分析檢測和定量測試中的理想標(biāo)記。

2、本發(fā)明納米熒光微粒可用可見光光源激發(fā)以及通過簡單的方法獲得，降低液相蛋白芯片檢測分析成本。