[發明專利]轉基因水稻科豐2號外源插入基因和側翼水稻序列的連接區序列及應用

有效

• 申請號: 201410081007.0
• 申請日: 2014-03-06
• 公開（公告）號: CN103834645A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發明（設計）人: 宛煜嵩;梁利霞;張秀杰;朱禎;金蕪軍;苗朝華;李亮;黃衛紅
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京康思博達知識產權代理事務所(普通合伙) 11426
• 代理人: 余光軍

1.轉基因水稻科豐2號外源插入基因載體和其兩端側翼水稻序列形成的連接區序列，其特征在于：其核苷酸序列為SEQ?ID?No.2所示。

2.轉基因水稻科豐2號外源插入基因載體和3’端側翼水稻序列形成的連接區序列，其特征在于：其核苷酸序列為SEQ?ID?No.13所示。

3.權利要求1所述的連接區序列作為靶基因應用于轉基因水稻科豐2號品系特異性定性檢測中的應用。

4.權利要求2所述的連接區序列作為靶基因應用于轉基因水稻科豐2號品系特異性定性檢測中的應用。

5.按照權利要求3所述的應用，其特征在于，包括：（1）提取待檢測水稻樣品的DNA；（2）以提取的DNA為模板，以SEQ?ID?No.2為靶基因設計檢測引物，建立PCR反應體系并進行PCR擴增；（3）如果從待檢測的樣品中擴增出預期的特異性條帶，則待檢測的水稻樣品是轉基因水稻科豐2號；如果從待檢測的樣品中未能擴增出預期的特異性條帶，則待檢測的水稻樣品不是轉基因水稻科豐2號。

6.按照權利要求4所述的應用，其特征在于，包括：（1）提取待檢測水稻樣品的DNA；（2）以提取的DNA為模板，以SEQ?ID?No.13為靶基因設計檢測引物，建立PCR反應體系并進行PCR擴增；（3）如果從待檢測的樣品中擴增出預期的特異性條帶，則待檢測的水稻樣品是轉基因水稻科豐2號；如果從待檢測的樣品中未能擴增出預期的特異性條帶，則待檢測的水稻樣品不是轉基因水稻科豐2號。

7.按照權利要求6所述的應用，其特征在于：所述的檢測引物為SEQ?ID?No.7和SEQ?ID?No.8所示。

8.按照權利要求6所述的應用，其特征在于：所述預期的特異性條帶的大小是201bp。

9.按照權利要求5或6所述的應用，其特征在于，所述的PCR反應體系為：反應體系的總體積為25.0μL，其中，10×PCR緩沖液2.5μL，25mmol/L氯化鎂溶液1.5μL，dNTPs混合溶液2μL，0.2μmol/L?SEQ?ID?No.7所示的引物0.5μL，0.2μmol/L?SEQ?ID?No.8所示的引物0.5μL，0.025U/μLTaq酶1.5μL，25mg/L?DNA模板2.0μL，余量為雙蒸水。

10.按照權利要求5或6所述的應用，其特征在于，所述的PCR擴增條件為：94℃，5min；94℃，30s，58℃，30s，72℃，30s，35個循環；94℃，2min。