[發明專利]一種ε-多聚賴氨酸菌及其制備與發酵方法

無效

• 申請號: 201410079901.4
• 申請日: 2014-03-06
• 公開（公告）號: CN103834594A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發明（設計）人: 茍興華;黃莉;蔡創;蔡永旭;于剛強;鐘凱強;鄒強;劉達玉;王衛
• 申請（專利權）人: 成都大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N15/01;C12P13/02;C12R1/465
• 代理公司: 四川君士達律師事務所 51216
• 代理人: 芶忠義

技術領域

本發明屬于發酵技術領域，尤其涉及一種ε-多聚賴氨酸菌及其制備與發酵方法。

背景技術

食品防腐劑是食品添加劑領域中主要門類之一，我國的食品防腐劑產量已達4萬多噸，但目前使用的防腐劑以化學合成防腐劑為主，科學家在長期的研究中，發現一些化學合成的防腐劑有誘癌性、致畸性和易引起事物中毒的現象。隨著人們對生活水平和對食品安全性的認識與要求的提高，食品添加劑也掀起了強烈的回歸自然、享受綠色與健康的浪潮，化學合成防腐劑也越來越受到人們的排斥。而ε-多聚賴氨酸（ε-Poly-L-lysine，ε-PL）是多以鏈霉菌屬的好氧發酵培養得到的一種天然微生物代謝產物，是經分離純化而獲得的發酵產品。ε-聚賴氨酸（ε-PL）是由賴氨酸單體組成的均聚多肽，具有熱穩定性好、水溶性強、安全性高、抗菌譜廣等優點，廣泛用于食品保鮮。此外，在基因治療、微囊藥物的制備、高分子材料等領域中，聚賴氨酸亦有著廣泛的用途，優良防腐性能和巨大商業潛力。ε-PL具有廣譜抑菌性，在酸性和微酸性環境中對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌以及酵母菌、霉菌均有一定的抑菌效果，而且其對耐熱性芽孢桿菌和一些病毒也有抑制作用。因此，ε-PL成為相關行業人士關注的熱點和重點。

發明內容

本發明的目的在于提供一種一種ε-多聚賴氨酸菌的發酵方法，旨在提供一種具有ε-多聚賴氨酸高產量潛力的發酵菌種。

本發明的再一目的在于提供上述ε-多聚賴氨酸菌的制備方法。

本發明的另一目的在于提供上述ε-多聚賴氨酸菌的發酵方法，旨在解決現有發酵方法ε-多聚賴氨酸的產量很低、分離純化繁瑣的問題。

本發明是這樣實現的，一種ε-多聚賴氨酸菌（Streptomycesgriseolusk6），于2013年10月10日保藏于四川抗菌素工業研究所，保藏編號為CCSIIA-51309。

本發明進一步提供了上述ε-多聚賴氨酸菌的制備方法，包括以下步驟：

（1）通過SG平板添加亞甲基藍和K₂Cr₇O₇初步篩選得到ε-聚賴氨酸產生菌TUST-2；

（2）通過不同劑量的亞硝基胍對ε-聚賴氨酸產生菌TUST-2的誘變處理，根據致死率確定誘變劑量，誘變結束時采用高倍稀釋法終止誘變；

（3）用SGB平板初篩透明圈較大且菌落長勢較好的誘變菌，確定SGB平板中甘氨酸和ε-PL的濃度，用甘氨酸和ε-PL抗性平板復篩出生長狀況良好的誘變菌；

（4）將復篩出的誘變菌進行發酵檢測ε-PL的產量，最后篩選出ε-PL產量最高的誘變株。

本發明進一步提供了一種ε-多聚賴氨酸的發酵方法，包括以下步驟：

（1）將上述ε-多聚賴氨酸菌菌種接種到活化培養基中，37℃搖床培養18～20h后，在8000rpm/min條件下離心5min，取沉淀用無菌水洗滌并配成濃度為10⁷CFU/ml菌液；

（2）將所述菌液按發酵培養基6%體積的接種量按裝液量20mL/mL接種至發酵培養基中，在發酵溫度30℃、初始pH7.0、搖床轉速200r/min條件下培養10～16h，得到ε-多聚賴氨酸發酵液。

優選地，在步驟（1）中，1L所述活化培養基包括以下按質量計各組分：

蛋白胨??????????9～10g，

牛肉浸出粉??????2～3g，

氯化鈉??????????4～5g。

優選地，在步驟（1）中，1L所述發酵培養基包括以下按質量計各組分：

本發明克服現有技術的不足，提供一種ε-多聚賴氨酸菌及其制備與發酵方法，該ε-多聚賴氨酸菌（Streptomycesgriseolusk6），于2013年10月10日保藏于四川抗菌素工業研究所，保藏編號為CCSIIA-51309，通過SG平板添加亞甲基藍和K₂Cr₇O₇初步篩選得到ε-聚賴氨酸產生菌TUST-2；通過不同劑量的亞硝基胍對ε-聚賴氨酸產生菌TUST-2的誘變處理，根據致死率確定誘變劑量，誘變結束時采用高倍稀釋法終止誘變；用SGB平板初篩透明圈較大且菌落長勢較好的誘變菌，確定SGB平板中甘氨酸和ε-PL的濃度，用甘氨酸和ε-PL抗性平板復篩出生長狀況良好的誘變菌；最后將復篩出的誘變菌進行發酵檢測ε-PL的產量，最后篩選出ε-PL產量最高的誘變株后獲得。