[發明專利]一種抗氧化多肽及其制備方法

有效

• 申請號: 201410079701.9
• 申請日: 2014-03-06
• 公開（公告）號: CN103804476A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發明（設計）人: 汪少蕓;王文龍;張毓琛;趙立娜;方衛東;邵彪;江勇
• 申請（專利權）人: 福州大學
• 主分類號: C07K14/405
• 分類號: C07K14/405;C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種抗氧化多肽，其特征在于：所述抗氧化多肽的氨基酸序列為：aviknyya。

2.一種如權利要求1所述的一種抗氧化多肽的制備方法，其特征在于：以小球藻為原料提取蛋白，然后采用酸性蛋白酶對其進行酶解，分離純化、冷凍干燥得到抗氧化多肽。

3.根據權利要求2所述的一種抗氧化多肽的制備方法，其特征在于：所述酶解條件為：pH為3.0、溫度50℃、酶解時間為5h、酶-底物配比為3000U/g；所述酶為酸性蛋白酶。

4.根據權利要求2所述的一種抗氧化多肽的制備方法，其特征在于：所述分離純化的方法包括超濾、SP-Sephadex?C-25離子交換色譜、Sephadex?G-50分子篩和RP-HPLC反相高效液相色譜。

5.根據權利要求2所述的一種抗氧化多肽的制備方法，其特征在于：所述分離純化的具體步驟為：

（1）酶解產物首先利用分子量截留范圍為8000Da和3500Da的超濾膜對酶解產物進行超濾分離，將其分為3個分子量范圍不同的組分，分別為分子量大于8000Da的組分、分子量介于3500Da和8000Da的組分、分子量小于3500Da的組分；

（2）收集具有最佳抗氧化活性的組分，再用SP-Sephadex?C-25陽離子交換色譜進行分離，上樣后洗去未吸附組分，再以含0～0.35mol/L?NaCl的0.02mol/L、pH4.0乙酸-乙酸鈉緩沖液進行線性梯度洗脫，流速為0.5ml/min，在225nm下進行測量，測定各吸收峰對應的洗脫組分的抗氧化活性；

（3）收集具有最佳抗氧化活性的峰，再用Sephadex?G-50凝膠色譜進行分離，洗脫液為去離子水，流速為0.5ml/min，在225nm下進行測量，測定各吸收峰對應的洗脫組分的抗氧化活性；

（4）收集具有最佳抗氧化活性的峰，再利用RP-HPLC反相高效液相色譜進行進一步的分離，所用色譜柱為Gemini?5μ?C18，上樣量為100μL，流速為1ml/min，檢測波長為215nm；洗脫液自含體積比為10%乙腈和90%水的混合液開始，至體積比為90%乙腈和10%水的混合液結束，進行梯度洗脫，收集體積比為61%乙腈和39?%水處的洗脫峰，得到所需抗氧化多肽；利用蛋白質固相序列分析儀鑒定多肽的氨基酸序列。