[發明專利]一種具有持續合成能力和鹽耐受度的DNA聚合酶

有效

• 申請號: 201410079508.5
• 申請日: 2014-03-06
• 公開（公告）號: CN103881989B
• 公開（公告）日: 2016-11-02
• 發明（設計）人: 程奇;翟冰;周國輝;李賢禎;劉國憲
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12N15/54;C12N15/70;C12N15/10
• 代理公司: 大慶市建華專利事務所 23119
• 代理人: 孫薇

1.一種具有持續合成能力和鹽耐受度的新型DNA聚合酶，是在金黃色葡萄球菌DNA聚合酶I（Sau）中插入有來源于T7噬菌體DNA聚合酶中的硫氧還蛋白結合結構域（TBD）而得到的雜合DNA聚合酶，其氨基酸序列如SEQ?ID?No.2所示，或該序列經替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

2.編碼權利要求1所示的具有持續合成能力和鹽耐受度的新型DNA聚合酶的基因，其核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示。

3.權利要求1所述的具有持續合成能力和鹽耐受度的新型DNA聚合酶的制備方法，其特征在于：該方法包括以下步驟：

（1）確定T7噬菌體DNA聚合酶TBD結構域在Sau蛋白中的對應位置，以及目標替換序列；

（2）根據GenBank已經公布的Sau基因序列以及TBD序列信息設計并合成引物，并通過Overlap?PCR技術擴增得到帶有純化標簽、酶切位點的將TBD插入Sau基因序列正確位置的Sau-TBD片段；

（3）將步驟（2）中得到的Sau-TBD克隆至表達載體pTrc99A中構建重組載體pTrc99A-Sau-TBD；

（4）表達載體pTrc99A-Sau-TBD轉化大腸桿菌、誘導表達得蛋白。

4.權利要求1所述的具有持續合成能力和鹽耐受度的新型DNA聚合酶在常溫核酸擴增技術中的應用。