[發明專利]綠色北蟲草產業化生產方法

有效

• 申請號: 201410079301.8
• 申請日: 2014-03-06
• 公開（公告）號: CN103843583A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發明（設計）人: 劉彥君;丁志強;劉昭常
• 申請（專利權）人: 劉彥君;丁志強;劉昭常
• 主分類號: A01G1/04
• 分類號: A01G1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種綠色北蟲草產業化生產方法，其特征是包括以下步驟：

（1）北蟲草的菌種制作方法：

每次使用首代液體母種應用生產，保持北蟲草菌種遺傳性狀的穩定性，確保出草和產業化優質栽培的成功率；

（1.1）?菌種的選擇

選用菌絲潔白、適應性強、見光后轉色快、出草快、性狀穩定的速生高產優質菌種；根據供銷需要，選擇以下任意品種；

（1.1.1）冬蟲夏草

子座形態特征：子座主莖圓柱型向上，頭部長錐形，有白色被生孢子囊體，菌絲萌發快，轉色快，抗雜力強，子座長6～8cm，莖粗1～2mm，生長快且齊整，干燥后子囊頭部仍顯黃白色，產量較蛹蟲草低，草質外觀不佳，蟲草素含量高；

（1.1.2）蛹蟲夏草

子座形態特征：子座主莖橢圓型向上，上部致頂端有許多小凸起的子囊孢子，呈淡桔黃色，菌絲萌發快，培養基轉色橙紅色，相繼發生乳黃色基點，子座發生較齊整，莖粗2～5mm，子座最長18cm；麥基子座橙紅色；米基子座桔黃色；

（1.1.3）頭孢蟲草?

子座形態特征：子座圓柱向上，頭部橢圓球狀，被生子囊孢子，菌絲發育快，轉色橙紅色，原基相繼發生，草長度不整齊，子座莖粗2～3mm，最長可達8cm以上；

（1.2）子座選擇

子座選擇是培養新菌株的關鍵；選擇子座金黃或橙紅，子座生長點頂端大、長勢強壯、整齊的蟲草和菌絲組織最密集，菌絲活力最強的部位；要求：選擇蟲草成熟度在9成以上，子座長度在90～120cm，子座頂部膨大直徑在3～5mm的高產優質蟲草；用滅菌剪刀貼培養基處切斷，子座排列整齊；

（1.3?）子座處理

（1.3.1）子座滅菌???

接種室潔凈度為100級，周邊區1000級；在無菌室內，取上述子座用鑷子夾住根部放在無菌水中浸洗50～60s，重復浸洗2～3次，然后用75%酒精或用濃度70～80%的氨基酸碘溶液浸洗30～60s滅菌；

（1.3.2）子座選擇?

滅菌后的子座在距生長點頂端2～4cm部位，用濃度70～80%的氨基酸碘溶液擦拭消毒的剪刀切取備用；

（1.4）菌種培養

（1.4.1）配制液體培養基配制

用去皮馬鈴薯500g、小麥100g、水1000ml，100～120℃煮熟25～30min，涼后用3～5層紗布或雙層濾紙過濾出溶液，再加葡萄糖干粉20～30g、酵母膏2～3g、天門冬酰胺1～2g、磷酸二氫鉀1.5～2g、硫酸鎂0.6～1g、生長素5～10ml、維生素B125～30g，加蒸餾水調至1000ml溶液，再加入亞硒酸鈉溶液，使亞硒酸鈉濃度達到60mg/kg；溶液pH值調至6～7.0；裝入10～500ml的試管或三角燒瓶中，制成液體培養基；試管或三角燒瓶用醫藥棉封口或耐高溫塑膜封口；

（1.4.2）液體培養基滅菌

用常溫滅種方法或高壓蒸汽滅菌均可；

（1.4.2.1）常溫滅菌：把盛有液體培養基的試管或三角燒瓶放在蒸鍋內，裝滿后把蒸鍋蓋緊，溫度升到103℃、壓力達到0.05～0.08?MPa，保持6－8hr，然后降溫、壓力表歸零移入接菌室接菌應用；

（1.4.2.2）高壓蒸汽滅菌：

具體條件如下：滅菌溫度：125℃；有效滅菌時間不低于3.5hr；滅菌壓力：0.135MPa；真空度：第一次真空度：-0.011～-0.055?MPa,15min，抽去冷空氣；第二次真空度：-0.055?MPa；真空度：-0.055?Mpa保持穩定；滅菌時間：5～7.5hr；燜置時間：滅菌結束后燜置30min，利于原料糖化、滅菌和營養物質的轉化；

（1.4.3?）液體培養基接種

（1.4.3.1）接種室要求：潔凈度為100級，周邊區1000級；

特別潔凈接種室技術指標：接種室：0.2個/30min.Φ90皿（5個/m³）；周邊區：0.4個/30min.Φ90皿（10個/m³）；表面最大染菌密度：5個/cm²；空氣潔凈度級別：接種室100級，周邊區1000級；物流：①袋料→清潔通道→接種室；接種后反向返回；②無菌物品、敷料、滅菌的儀器及器材、菌種、一次性無菌物品→清潔通道→接種室；接種后反向返回；接種人員：清潔區換鞋→一更衣室，脫去外面工作服→二更換接種衣→緩沖間或直吹室→潔凈走廊→刷手間→潔凈接種室；接種后反向返回；）其他指標和監測項目：?

①溫度：18～26℃；

②相對濕度：?45～65%?；

③照度：≥300lx；

④沉降菌（個/Φ90mm0.5h）：?≤10?；

⑤靜壓差：潔凈區與非潔凈區之間>10Pa；?

潔凈級別不同房間之間>5Pa；?

⑥塵埃粒子數（個/立方米）：?≥5μm?0?≤20000?≤60000；

（1.4.3.2）選擇子座：

步驟“1.3.2?子座選擇”的子座用無菌水擦刷表層并沖洗，撕開子座，用解剖刀從子座內心切取麥粒大組織塊，每個試管放置1～5個滅菌子座組織塊，三角燒瓶放置1～50個滅菌子座組織塊；要求：每10ml液體培養基放置1個滅菌子座組織塊；然后用醫用藥棉封口；

（1.4.4）液體菌種培養

盛有液體培養基的試管或三角燒瓶，在下列條件下培養7～10d，形成菌球，生產出高濃度的北蟲草菌種懸濁液：

溫度：20～28℃；濕度：65～70%；光照：黑暗；?PH值：6.0～7.0；時間：7～10d；條件：搖床培養；

優質北蟲草菌種懸濁液目測標準：純菌球多、菌液清晰；

劣質菌種懸濁液目測標準：純菌球少、菌液混濁或凈止時間長，菌膜少的菌種應淘汰；

（1.5）液體菌種保存

有菌種保存箱或用梭氏法保存兩種方法，任選一種方法保存；

（1.5.1）用菌種保存箱保存

用菌種保存箱保存；要求：溫度10℃；保存天數：7-15d；液體菌種隨時制作隨時用，防止退化、活力減弱；

（1.5.2）用梭氏法保存

梭氏法保存：將容有?1滴北蟲草菌種懸液的小管﹐置于盛有氫氧化鉀或五氧化二磷吸水劑的大試管中﹐用真空泵抽至1.3帕時﹐將大試管密封保存；這是為減少細胞死亡率而采取的一種不經凍結﹑緩慢脫水的干燥保藏法﹐適用于多種細菌﹑真菌；

要求：溫度10℃；保存天數：7～15d；液體菌種隨時制作隨時用，防止退化、活力減弱；

（2）北蟲草產業化生產方法

（2.1）培養基制作

（2.1.1）養菌室消毒滅菌

首先對培植北蟲草的室內進行嚴格消毒處理，可使用煙霧彈、過氧乙酸等消毒劑（粉或液）空氣消毒滅菌、地面用濃度10%高錳酸鉀擦洗干凈，進行封閉2～4hr備用；

（2.1.2）配置營養液

營養液配方按重量百分比：

磷酸二氫鉀：20～40g；維生素B1、B2：各20～30g；食用葡萄糖粉：30～50g；加蒸餾水全部溶解，并調配到1000ml，再加入亞硒酸鈉溶液，使亞硒酸鈉濃度達到60mg/kg；?PH值：清水加入碳酸氫鈉，調制PH7.5～8；

（2.1.3）塑料盆培養基制作

（2.1.3.1）配料處理；?200L水加入4ml慶大霉素，將小麥、碎玉米、大米浸泡4～5hr，撈出雜質，淋干配料水分，10斤小麥加入2斤大米拌均備用；

（2.1.3.1）配方配料；把小麥、大米、碎玉米按比例混合均勻或者單一小麥灌裝到白色聚乙烯塑料盆中，灌裝深度1.5～2cm，加營養液后覆蓋耐高溫塑料薄膜，再用耐高溫皮筋扎緊扎實等待高溫滅菌，制作成塑料盆培養基；或不覆蓋高溫塑料薄膜，制作成塑料盆培養基；

配料如下按重量百分比：

小麥：1000g；玉米：100～200g，玉米破碎；大米：100～200g；營養液：加入營養液與小麥的比例：0.5～2ml：1～5g，以配料全吸收無液體流動為最佳；

白色聚乙烯塑料盆規格：長×寬×高=40～100×40～60×10～15cm；

（2.2?）滅菌

用常溫滅種方法或高壓蒸汽滅菌，兩種方法任選一種；

（2.2.1）常溫滅菌

把塑料盆培養基平放在蒸鍋內，主要把小麥等料搖平至全部覆蓋塑料盆底部并均勻，裝滿后把蒸鍋蓋緊，溫度升到103℃、壓力達到0.05～0.08?MPa，保持6－8hr，然后降溫、壓力表歸零移入接菌室接菌應用；

（2.2.2）高壓蒸汽滅菌

具體條件如下：

滅菌溫度：125℃；有效滅菌時間不低于3.5hr；滅菌壓力：0.135MPa；真空度：第一次真空度：-0.011～-0.055?MPa,15min，抽去冷空氣；第二次真空度：-0.055?MPa；真空度：-0.055?Mpa保持穩定；滅菌時間：5～7.5hr；燜置時間：滅菌結束后燜置30min，利于原料糖化、滅菌和營養物質的轉化；

（3）接種

用常規接種或高潔凈度接種室接種方法，任選一種；

（3.1）常規接種

（3.1.1）覆蓋塑料薄膜的培養基接種

接種前要把接種室進行全方位消毒處理--使用煙霧彈、過氧乙酸等消毒劑（粉或液）、地面用高錳酸鉀擦洗干凈，進行封閉2～4hr滅菌；工作人員的服裝也在消毒室進行消毒，人員進入必須換上紫外線消毒過的服裝；把蒸過的盆放在空氣凈化臺上進行接種；用接菌機微細針頭刺破塑料盆上的塑料膜，向里面培養基均勻噴灑液體菌種，把培養基全部覆蓋均勻，靜置3～4hr，移到培養室上架；

（3.1.2）不覆蓋塑料薄膜的培養基接種

不覆蓋塑料薄膜的塑料盆培養基，用用接菌機均勻噴灑液體菌種，然后在菌體表面用接種槍噴灑成膜劑；成膜劑配方質量百分比：

殼聚糖：固體粉末CS-90粉或殼聚糖溶液CS-90，其中殼聚糖質量百分比含量2%，醋酸質量百分比含量為2%：2.5%以下；

乳化劑：農浮600號1.0～5.0％；

分散展著劑：分散展著劑0.5～5.0％；

pH值調節劑：0.1～5.0％；

上述物質加蒸餾水或礦泉水按比例配成15000ml溶液；

（3.2）高潔凈度接種室接種

（3.2.1）接種室條件

接菌室，具備封閉性好，有通排過濾凈化空氣裝置，設有紫外線燈滅菌和煙霧，氣霧化學間替性滅菌措施，接菌工具有火焰消毒，酒精和滅菌劑消毒，后并由無菌水沖洗，確保不帶雜菌的條件，接種室為100級潔凈度；

滅菌后的盛料塑料盆在接種室接種，接菌后靜置3～4hr，移到培養室上架；

3.2.2液體菌種處理

對液體菌種嚴格審查無雜菌后，對原液體菌的菌球應用攪拌器打碎菌球，否則接菌點少并有堵塞接種槍槍孔的現像；100～200ml原液體菌種加蒸餾水兌至1000ml液體菌種；

（3.2.3）接種

用75%酒精棉球擦抹接種槍針頭和塑料盆覆蓋的塑料膜針眼部位，插入針頭，射2～3次，形成盆內菌種全覆蓋，植入菌種后培養基全吸收菌液為最佳，上架躺放時不流液體于瓶壁底位部；

（4）培養室管理

（4.1?）養菌

（4.1.1）塑料盆培養基擺放

接種后的塑料盆培養基平放在消毒滅菌后的養菌室內，整齊的平方塑料盆培養基；

第一種方法碼垛盆，以塑料盆間空碼垛：

第一層：塑料盆培養基在縱、橫方向上彼此留有稍小于塑料盆寬度的間隙；

第二層：塑料盆培養基放在第一層塑料盆培養基的上方間隙處；

第三層：塑料盆培養基放在第二層塑料盆培養基的上方間隙處；以此類推，可以放置10～20層的高度，各層間呈“品”字形排列；

透明的塑料盆通過這種碼垛盆方法，使得各層的塑料盆在有光線的條件下得到的散射光足以滿足生長需要；

或第二種方法架體結構：

塑料盆培養基放置在金屬層架上，每層架高度30～50cm、寬度60～80cm、長度任意；

擺放塑料盆培養基的四周留有80～150cm寬的工作道；

（4.1.2?）養菌出草

塑料盆培養基擺放完畢后，養菌室內靜置養菌；

（4.1.2.1）菌絲培育；條件是：

室內溫度：15～20℃，架體上中下設溫度表檢查，并做好記錄；室內濕度：75～85%；室內光照：黑暗；養菌時間：3～4d；

（4.1.2.2?）子座培育

第5天給光，條件是：

室內溫度：18～23℃；室內濕度：65～70%；保持濕度是滿足菌絲體的水分供應；采收前10～15d降低空氣濕度至50～65%，防止成熟過快導致菌株死亡；

光照強度：弱光，200～500lux或每隔2～5m，放置一個3～5W的LED燈照明；基內菌絲形成接菌部位幅射狀態時，夜間全時給光，白日需外入散射光線，直至采收期；

培植時間：30～45d；在8～10d后菌絲由白轉黃或橙紅色時，繼續培植，不斷生長；

氧氣：滿足菌絲體的氧氣供應；觀察，當菌絲輻射外圍生長時，用釘板刺出封閉膜孔道，放出二氧化碳，輸入新鮮空氣，促進菌絲生長過程轉色性縵延生長；

（4.1.2.3）注意事項

濕度控制：菌絲與子座生長發育，都需要水分，濕度大容易行成氣生菌絲，影響子座發生率和轉色慢的現象；濕度小，則影響子座生長的產量和菌絲體靠水分輸送營養，造成生長發育不良的現象；控制培養基pH值：一是配制培養基時pH值8～9高出最佳pH值6～7，在滅菌時PH值降低1～2個，尤其滅菌和降溫的時間延長，造成pH值的下降，這是做好余量準備；

（5）采收分級與包裝

（5.1）采收標準

北蟲草植育40～45天時，子座上部至頂端形成凸起孢子囊時，子座長6～15cm、菌株孢頭直徑2～6mm時蟲草成熟，進入采收期，要及時收獲，在架體上有封口薄膜的塑料盆揭去封口膜、促進子實體失水和以收縮的培養基繼續收縮2～4hr，可連草帶培養基一塊拔出處理；

（5.2）采收方法

有封口薄膜的塑料盆去膜，一手握住蟲草、一手握住培養基撕下或一手握住蟲草、一手用剪刀剪下或用機械刀具割下；一茬蟲草收貨后，每盆噴灑營養液10～100ml，可以出二茬蟲草，以此類推，可以出草3茬；

（5.3）北蟲草分級方法

（5.3.1）按照外觀分級

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（5.3.2）按照營養高和藥理成分的分級

短草的營養高于高草，有些藥理成分，短草要低于高草的成分，由客戶需求質量標準或深加工標準來選定及定價；

（5.3.3）碎草回收

分級干燥處理過程中，有碎草產生和桔黃色子囊孢子粉，要分別凈選包裝以利增值收益；

（5.4）延長保鮮期方法

采收的蟲草在8～10℃的溫度下預冷1～2hr，延長蟲草的保鮮期；

（5.5）包裝方法

實行封裝模式包裝；用塑膜袋和真空包裝機抽真空包裝；

（6）烘干與保存

有兩種方法，常規烘干或凍干，選擇任何方法均可；

（6.1）常規烘干

要邊采邊烘干，不要積壓，烘干時把草放在烘干架上要放置區均勻，避免加熱不均，烘干時溫度保持40～80℃，待干后再放再回潮，回潮到草有點扎手，但是草還不碎時就可裝袋；

（6.2）凍干

凍干食品是將新鮮食品快速冷凍后，送入真空容器脫水而成，在真空條件下，水分由固態冰升華成氣，從而使物料脫水干燥。