[發明專利]一種低溫生產幾丁質酶的菌株及其發酵方法

有效

• 申請號: 201410078945.5
• 申請日: 2014-03-05
• 公開（公告）號: CN104893997B
• 公開（公告）日: 2018-01-16
• 發明（設計）人: 尹恒;王曉輝;杜昱光;遲乃玉;李曙光;曹海龍;趙勇
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/42;C12R1/01
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司21002
• 代理人: 馬馳

1.一種低溫生產幾丁質酶的菌株，其特征在于：命名為交替假單胞菌（Pseudoalteromonas sp.）DL-6，該菌株已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏單位名稱：中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏日期：2013年12月13日，其保藏編號為CGMCC NO.8580。

2.一種采用權利要求1所述菌株DL-6低溫生產幾丁質酶的發酵方法，其特征在于：

（1）將所述菌株接種于固體種子培養基上，在4～30℃培養48-96 h，制成固體種子；

（2）將幾丁質酶生產菌在4～30℃于液體種子培養基中進行液體擴大培養，制備成液體一級種子；

（3）將液體一級種子按發酵液體積的1～9%接種量接入液體發酵培養基中，在14～20℃培養48～96 h時，即微生物低溫發酵生產幾丁質酶結束；或將液體一級種子于液體種子培養基中進行液體擴大培養制備成液體二級種子，將液體二級種子按發酵液體積的1～9%接種量接入液體發酵培養基中，在14～20℃培養48～96 h時，即微生物低溫發酵生產幾丁質酶結束；

(4)將(3)的發酵液在4,000～8,000 g離心收集液體，獲取發酵物。

3.按照權利要求2所述的發酵方法，其特征在于：

根據不同需要和使用對象不同，將(4)得到的發酵物經10000 g離心10min去除菌體，上清液經60%飽和硫酸銨在4℃攪拌過夜，12000g離心30min，收集沉淀，用PBS緩沖液重新溶解沉淀，其中PBS緩沖液的濃度為0.02～0.05M，pH 7.0-8.0，再用相同緩沖液透析除鹽，制備成液體酶制劑。

4.按照權利要求2所述的發酵方法，其特征在于：其中固體種子培養基、液體種子培養基、發酵培養基分別為：

（1）固體種子培養基：牛肉膏1.0 g；胰蛋白胨5.0 g；瓊脂粉15.0 g；海水1.0L，121℃高壓蒸氣滅菌30 min；

（2）液體種子培養基：牛肉膏1.0 g；胰蛋白胨5.0 g；海水1.0L，121℃高壓蒸氣滅菌30 min；

（3）發酵培養基：膠體或細粉幾丁質5.0 g；蛋白胨5.0 g；海水1.0L，121℃高壓蒸氣滅菌30 min。