[發明專利]一種KRAS基因突變檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201410078862.6
• 申請日: 2014-03-05
• 公開（公告）號: CN103937664A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 王彤;陳大方
• 申請（專利權）人: 瑞希基因科技（北京）股份有限公司
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12Q1/68
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 楊立

技術領域

本發明涉及一種KRAS基因突變檢測試劑盒，屬于生物技術領域。?

背景技術

1)KRAS基因突變在結直腸癌中的臨床意義?

近年來，隨著人民生活水平的不斷提高，飲食習慣和飲食結構的改變以及人口老齡化，我國結直腸癌（colorectal?cancer,CRC）的發病率和死亡率均保持上升趨勢。其中，結腸癌的發病率上升尤為顯著。大多數患者發現時已屬于中晚期。結直腸癌發病率22.1萬，死亡率11萬，5年生存率63.7%。?

KRAS是EGFR（表皮生長因子受體）信號傳導通路中的一個關鍵的下游調節因子，參與細胞生長的調節，在癌變發生過程中起著重要作用。KRAS基因產物參與了控制基因轉錄的激酶信號傳導路徑，從而能調節細胞的生長與分化。KRAS基因的改變使KRAS蛋白發生變化，其結果KRAS蛋白不再具有裂解GTP分子和釋放GTP分子的能力。這樣的改變導致這條信號傳導路徑始終處于“開”通的狀態。這種“開”的信號導致細胞的生長和增生。因此KRAS的過度表達與擴增導致持續的細胞增殖，這是腫瘤發生的關鍵一步。?

西妥昔單抗和帕尼單抗是作用于EGFR的單克隆抗體，可以抑制下游的信號通路傳導。2008年6月,美國臨床腫瘤學會(ASCO)年會上CRYSTAL、OPUS等研究了西妥昔單抗聯合FOLFIRI和FOLFOX作為轉移性結直腸癌的初始治療作用，結論為：KRAS野生型患者在加用西妥昔單抗治療后PFS得到了顯著改善。若KRAS有突變，則無論單藥或聯合均不應使用西妥昔單抗或帕尼單抗，因為不僅無效，還增加副反應，浪費金錢。?

2008年10月，KRAS基因檢測被寫入《美國國立癌癥綜合網絡(NCCN)?結直腸癌臨床實踐指南》，專家組強烈推薦所有轉移性結直腸癌患者均應進行KRAS基因型檢測，原發灶或繼發灶組織均可，對于KRAS野生型的患者可考慮進一步檢測BRAF分型。?

2010年版中國《結直腸癌診療規范》指出：完整的病理報告內容應該包括K-ras基因狀態的檢測，同時晚期/轉移性結直腸癌靶向藥物治療前應檢測KRAS。?

2)KRAS基因突變在非小細胞肺癌NSCLC的臨床意義?

原發性肺癌（以下簡稱肺癌）是我國最常見的惡性腫瘤之一。2012年WHO統計顯示，肺癌是我國目前發病率和死亡率第1位的惡性腫瘤。基于肺癌的生物學特性、治療和預后，WHO將其分為兩大類：非小細胞肺癌NSCLC和小細胞肺癌SCLC。其中NSCLC占肺癌的85%以上。雖然治療肺癌技術有了很大的提高，但5年生存率沒有明顯改善，而且大多數肺癌患者死于無法控制的遠處轉移，傳統的化療和放療由于缺乏特異性，取得療效的同時也往往給患者帶來較大的副作用。因此，選擇肺癌細胞特異的分子靶點，應用針對該靶點的藥物進行治療，在取得明顯療效的同時又避免對正常細胞的傷害的治療模式，已經被腫瘤學術界和廣大患者所認同和采用。?

EGFR（epidermal?growth?factor?receptor,表皮生長因子受體）是目前用于NSCLC分子靶向治療的最主要靶點。EGFR受體抑制劑TKI小分子酪氨酸激酶抑制劑（tyrosine?kinase?inhibitor），通過阻斷細胞受體的ATP結合位點，阻止下游信號傳遞而產生抑制腫瘤作用。?

三種EGFR-TKI（吉非替尼/易瑞沙，厄羅替尼/特羅凱，和凱美鈉）是目前用于NSCLC分子靶向治療的主要藥物，但在不同的病人中EGFR-TKI的療效差異很大。大量臨床實驗發現，除了EGFR突變，KRAS突變能幫助NSCLC病人更好的預測吉非替尼療效；KRAS突變的NSCLC病人用厄洛替尼聯合處理后臨床預后較差。?

2012年《美國國立癌癥綜合網絡(NCCN)非小細胞肺癌臨床實踐指南》病?理評估原則中明確：KRAS突變和內源性TKI耐藥有關，確定KRAS基因狀態有助于選擇適合TKI治療的病人。同時指出，KRAS基因狀態是NSCLC生存的預后指標，也是EGFR-TKI藥物的療效預測指標；還和順鉑/長春瑞濱化療療效相關。?

目前臨床檢測KRAS基因突變的檢測試劑原料配備較多，實驗過程較為繁瑣，設計的原料種類較多，耗時較長，容易污染，準確性不高，另外冷凍的試劑反復凍融多次會造成試劑失效，所以探索一種檢測KRAS基因快速可靠的方法已經成為臨床實驗不得不解決的問題。?

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種KRAS基因突變檢測試劑盒，本試劑盒結構完全基于一種新的實驗方法設計，結構簡單合理、使用方便、分區設計使得檢測過程不易受污染。?