[發(fā)明專利]CNTF在角膜緣干細(xì)胞增殖和角膜上皮損傷修復(fù)中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410075767.0
• 申請日: 2014-03-03
• 公開（公告）號: CN103800894A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周慶軍;陳鵬;謝立信;張陽陽;狄國虎
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省眼科研究所
• 主分類號: A61K38/18
• 分類號: A61K38/18;A61P27/02
• 代理公司: 青島海昊知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所有限公司 37201
• 代理人: 曾慶國

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于眼科疾病治療技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子（CNTF）在促進(jìn)角膜緣干細(xì)胞增殖和促進(jìn)角膜上皮損傷修復(fù)中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

角膜的透明及功能的完整取決于角膜各層組織的結(jié)構(gòu)和代謝的正常，而位于最外層的角膜上皮組織無疑對此起著相當(dāng)重要的作用。角膜上皮是防御外界致病因子侵犯的物理屏障，其完整性的維持依賴于上皮細(xì)胞的細(xì)胞間，細(xì)胞與基底膜之間的緊密連接和錨定連接以及上皮細(xì)胞不斷自我更新。

角膜上皮層受損可影響細(xì)胞間的連接，引起細(xì)胞膜的通透性和選擇性發(fā)生變化，從而影響其屏障功能，導(dǎo)致角膜易受外界致病因子的侵害引起炎癥導(dǎo)致角膜混濁，甚至引起失明。角膜損傷后的再上皮化是損傷修復(fù)的一個(gè)最基本的過程，上皮化可以迅速重建上皮屏障，這對于保持角膜的結(jié)構(gòu)完整及正常功能非常重要。角膜上皮細(xì)胞的自我更新源于角膜緣干細(xì)胞的不斷增生分化，表現(xiàn)為增生的基底細(xì)胞的不斷向心、向上移動至翼狀細(xì)胞層進(jìn)行分化且形成細(xì)胞與細(xì)胞間及細(xì)胞與基質(zhì)間的緊密連接，從而取代不斷脫落的表皮細(xì)胞層。簡而言之，上皮細(xì)胞的不斷更新依賴于基底細(xì)胞的不斷增生、分化、移行與表層細(xì)胞的不斷脫落之間的動態(tài)平衡。各種物理損傷、化學(xué)損傷、機(jī)械損傷、病原微生物、內(nèi)分泌及免疫性因素均可導(dǎo)致角膜上皮損傷。如糖尿病性角膜病變，有研究表明：47%-64%的糖尿病患者可能會出現(xiàn)原發(fā)性角膜病變，其臨床特征主要表現(xiàn)為角膜敏感度下降、上皮愈合延遲、神經(jīng)營養(yǎng)性角膜潰瘍等癥狀。糖尿病患者在進(jìn)行白內(nèi)障或視網(wǎng)膜手術(shù)后可能出現(xiàn)角膜上皮再生延遲，甚至出現(xiàn)反復(fù)剝脫現(xiàn)象。

角膜上皮損傷后的愈合是一個(gè)非常復(fù)雜的過程，有許多細(xì)胞參與，各種細(xì)胞又分泌多種細(xì)胞因子，這些細(xì)胞之間、因子之間、細(xì)胞和因子之間存在著錯(cuò)綜復(fù)雜的關(guān)系，涉及到細(xì)胞運(yùn)動、粘附、增殖和分化等各個(gè)方面，構(gòu)成一個(gè)復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控體系。角膜上皮損傷后的愈合過程非常復(fù)雜，有許多因素參與調(diào)節(jié)：①源于基底細(xì)胞及角膜緣干細(xì)胞的不斷增殖、分化的上皮細(xì)胞的自我更新對上皮細(xì)胞損傷后的迅速再上皮化、重建上皮屏障，從而保持角膜的結(jié)構(gòu)完整及正常功能非常重要；②在角膜上皮愈合過程中，由細(xì)胞表達(dá)的不同的細(xì)胞外基質(zhì)分子及細(xì)胞表面受體，對由細(xì)胞骨架介導(dǎo)的細(xì)胞粘附和運(yùn)動方面起關(guān)鍵性作用；③許多生長因子如EGF、KGF、HGF、TGF、PDGF等）通過自分泌或/和旁分泌途徑參與調(diào)節(jié)角膜上皮細(xì)胞的增殖及遷移，維持角膜結(jié)構(gòu)和功能的正常；④位于細(xì)胞表面的細(xì)胞粘附分子（如整合素）以受體-配體的形式發(fā)揮作用，在角膜創(chuàng)傷愈合中起重要作用；⑤另外，其他一些因素如神經(jīng)性因素等也參與調(diào)節(jié)角膜上皮細(xì)胞的屏障功能及創(chuàng)傷愈合。

不論何種原因引起的角膜上皮缺損，能否迅速完整地修復(fù)，是恢復(fù)角膜上皮細(xì)胞的屏障功能、促進(jìn)創(chuàng)傷愈合、保持良好視力的關(guān)鍵。因此全面了解角膜上皮細(xì)胞屏障功能及創(chuàng)傷愈合的調(diào)節(jié)因素，對臨床上治療角膜上皮細(xì)胞屏障功能障礙及促進(jìn)創(chuàng)傷愈合來講是非常重要的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子在促進(jìn)角膜緣干細(xì)胞增殖和促進(jìn)角膜上皮損傷修復(fù)中的應(yīng)用，具體涉及睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子及其衍生物在制備藥物及藥物組合物中的用途，可用于眼表角膜和結(jié)膜上皮干細(xì)胞的培養(yǎng)、糖尿病角膜病變的治療、神經(jīng)性角膜炎的治療、角膜緣干細(xì)胞缺乏癥的治療。

本發(fā)明首先提供一種睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子的新用途，即在制備治療角膜緣干細(xì)胞增殖和促進(jìn)角膜上皮損傷修復(fù)制品中的應(yīng)用；

所述的制品為滴眼液，其中包含有藥理有效濃度的睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子；

所述的制品還可以是注射液；

所述的睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子，其氨基酸序列為SEQ?ID?NO:1;

為了提高睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子在治療角膜緣干細(xì)胞增殖和促進(jìn)角膜上皮損傷修復(fù)中的效果，發(fā)明人對睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子的氨基酸序列進(jìn)行了改造，改造后的氨基酸序列為SEQ?ID?NO:2。

本發(fā)明發(fā)現(xiàn)CNTF不僅能促進(jìn)角膜緣干細(xì)胞增殖和克隆形成能力，還能促進(jìn)正常小鼠和糖尿病小鼠的角膜上皮的損傷修復(fù)，可用于眼表角膜和結(jié)膜上皮干細(xì)胞的培養(yǎng)、糖尿病角膜病變的治療、神經(jīng)性角膜炎的治療、角膜緣干細(xì)胞缺乏癥的治療。

附圖說明

圖1：在TKE2的培養(yǎng)基中添加不同濃度的CNTF對細(xì)胞克隆形成能力的影響，培養(yǎng)液中添加10ng/ml和20ng/ml?CNTF能有效促進(jìn)TKE2細(xì)胞克隆的形成能力。