[發明專利]一種采用一測多評檢測人參提取物中多個或總人參皂苷含量的方法

無效

• 申請號: 201410075766.6
• 申請日: 2014-03-04
• 公開（公告）號: CN103776937A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發明（設計）人: 趙玉男;王中立;戴建國;陳琳;黃玉芳
• 申請（專利權）人: 南京中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于中藥和化學技術領域，具體地涉及一種基于電噴霧檢測器柱后流動相補償法測定人參提取物中多個或總人參皂苷含量的方法。

背景技術

基于中藥有效成分的復雜多變，多個或總結構類似物含量測定成為中藥質量有效的控制模式。但中藥化學對照品貨源緊缺阻礙了這一模式的發展。通過測定一個易得對照品的含量實現對多個或總結構類似物的含量分析是解決上述問題的可行策略(一測多評)。

目前，公開報道的利用一測多評法測定人參提取物中多個人參皂苷含量的方法，主要采用陣列管檢測器(DAD)，選定一個容易獲得的單體人參皂苷標準品作為內參，然后在校正因子的幫助下同時測定多個人參皂苷的含量(Gao?XY，Jiang?Y，Lu?JQ，et?al.J?Chromatogr?A，2009，1216(11)：2118-2123；Zhu?JJ，Wang?ZM，Kuang?YH，et?al.Yao?Xue?Xue?Bao，2008，43(12)：1211-1216.)。然而，這個方法也存在諸多問題。比如：在一測多評法建立的過程中，所有能引起檢測器響應值變化的因素均有可能引起相對校正因子的波動。不同實驗室、不同型號的高效液相色譜儀、檢測器燈的工作狀態、不同色譜柱以及流動相的組成比例、pH值、柱溫、流速、檢測波長等微小改變均會引起相對校正因子的改變，在實測值與計算值之間引入誤差。面對上述問題，尋求一種不需要校正因子即可實現一測多評或一測總評的分析方法，是廣大分析工作者面臨的共同任務和難題。

發明內容

發明目的：為了解決上述問題，本發明提供一種采用電噴霧檢測器(CAD)流動相補償技術，實現無需校正因子也可采用一測多評檢測人參提取物中多個或總人參皂苷含量的方法。

本發明所要解決的技術問題是根據電噴霧檢測器(CAD)流動相補償技術，提供一種無需校正因子也可采用一測多評檢測人參提取物中多個或總人參皂苷含量的方法。

技術方案：本發明的目的是通過如下方案實現的：

(1)優化液相色譜條件基線分離人參提取物中的主要化學成分；(2)采用液質聯用技術(LC-MS)輔助確認人參皂苷目標峰的位置；(3)人參提取物中單個代表性人參皂苷的含量測定；(4)采用電噴霧檢測器(CAD)流動相補償技術一測多評人參提取物中多個或總人參皂苷的含量。具體步驟如下：

①液相色譜分離條件：C18反相色譜柱(150mm×2.1mm；粒徑，2.2μm)；柱溫(30℃)；流動相(溶劑A為0.2％甲酸；溶劑B為乙腈)；進樣體積(2μL)；梯度洗脫程序(0-25min，18％B；25-30min，18-23％B；30-65min，23-38％B；65-75min，38-58％B；75-83min，58-78％B；83-90min，78％B)。

②LC-MS參數：電噴霧電離源(ESI)，噴霧電壓(4.0kV)，鞘氣壓力(35psi)，輔助氣體壓力(15psi)，毛細管溫度(350℃)，碰撞電壓(1.5psi)，負離子檢測模式(掃描范圍m／z100～1,600)。對人參皂苷目標峰的指認基于3點，一是高分辨質譜提供準確的m／z值，二是和標準品比對，三是在沒有標準品的情況下，基于文獻報道的人參皂苷色譜保留行為，進行輔助推測。

③基于LC-CAD色譜系統，采用外標一點法對人參提取物中人參皂苷Rg1、Re以及Rd進行含量測定。

④選取人參二醇(PPD)、人參三醇(PPT)以及8個人參皂苷單體成分(Rg1、Re、Rh1、Rb1、F1、Rd、化合物CK和Rh2)，分別在沒有流動相補償和有流動相補償的情況下，通過計算相對標準偏差(RSD)，比較它們在相同濃度下CAD的響應情況。RSD<5％可說明檢測器對相同質量的不同分析物具有一致的響應。

⑤方法學驗證：柱后流動相補償下的CAD對相同質量的不同分析物有一致的響應，因此目標分析物在提取物中的含量可通過以下公式計算得出(一測多評)：目標分析物含量=內參標準含量×(目標分析物峰面積／內參標準峰面積)。比較采用外標一點法和CAD柱后流動相補償技術下的一測多評法計算得出的目標分析物含量，計算RSD，RSD<5％可說明方法學可靠。進一步，內參標準和目標分析物為人參皂苷Rg1、Re以及Rd。

⑥采用CAD柱后流動相補償技術下的一測多評法測定人參提取物中多個人參皂苷的含量，或者測定人參提取物中所有人參皂苷的含量，求和得出總人參皂苷的含量。

有益效果：