[發明專利]一種含有MALAT1啟動子序列和報告基因的載體及其構建方法和用途

有效

• 申請號: 201410075547.8
• 申請日: 2014-03-04
• 公開（公告）號: CN103898158B
• 公開（公告）日: 2019-10-29
• 發明（設計）人: 李琦;任建琳;季青;劉宣;隋華;周利紅;劉寧寧;朱惠蓉;顏琳琳;馮媛媛
• 申請（專利權）人: 上海中醫藥大學附屬曙光醫院;上海中醫藥大學附屬市中醫醫院
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/66;C12Q1/6886;C12Q1/02;C12N5/10
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 巫蓓麗

本發明涉及一種含有MALAT1啟動子序列和報告基因的載體及其構建方法和用途。具體地，將MALAT1的啟動子序列（1100bp）插入pGL3?Basic載體，構建獲得含MALAT1啟動子和報告基因luc⁺的重組質粒pGL3?Basic?MALAT1?promoter。該重組質粒與海腎螢光素酶報告基因載體pRL?SV40共轉染腫瘤細胞，添加候選抗腫瘤藥物作用細胞，然后通過檢測雙熒光素酶活性可以反映各藥物對MALAT1基因啟動子轉錄活性的影響，從而應用于靶向MALAT1基因的抗腫瘤藥物篩選。該方法特別適合大規模針對MALAT1基因的抗腫瘤藥物的篩選，方法簡單，直觀和快速，靶向性強，無放射性。

【技術領域】

本發明涉及分子生物學技術領域，具體地說，是一種含有MALAT1啟動子序列和報告基因的載體及其構建方法和用途。

【背景技術】

腫瘤的發生是一個涉及多種癌基因如原癌基因及抑癌基因的多階段過程，是多基因協同作用的結果。當癌基因與抑癌基因之間的平衡被打破，控制細胞增殖的癌基因持續或過高表達，同時抑癌基因不表達或失活時，便會使癌變細胞逃避機體免疫機制的控制，形成腫瘤，進而導致細胞的惡化及轉移。

長鏈非編碼RNA（long noncoding RNA，lncRNA）是一類轉錄本長度超過200nt的RNA，它們本身并不編碼蛋白，而是以RNA的形式在多種層面上調控基因的表達水平。隨著近年來lncRNA不斷的被發現，人們越來越多的關注lncRNA在各種生物學過程以及疾病中的功能。

LncRNA-MALAT1（Metastasis Associated in Lung Adenocarcinoma Transcript1）于2003年被首次發現，其在非小細胞癌患者組織中顯著高表達，隨后該基因在其它很多腫瘤如肝癌、胰腺癌、前列腺癌、腸癌、乳癌等癌組織中也發現過表達。

目前國內外剛剛開始致力于長鏈非編碼RNA的研究，其在腫瘤領域的研究相比于microRNA還處于初步階段。MALAT1基因跟多種腫瘤的侵襲轉移密切相關，而針對該基因進行的抗腫瘤藥物的篩選也沒有建立標準而有效的方法，極大的限制了針對MALAT1基因進行藥物治療的研究。

【發明內容】

本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種含有MALAT1啟動子序列和報告基因的載體。

本發明的再一的目的是，提供上述載體的構建方法。

本發明的另一的目的是，提供上述載體的用途。

本發明的第四個目的是，提供一種細胞株。

本發明的第五個目的是，提供一種篩選針對MALAT1基因的抗腫瘤藥物或比較針對MALAT1基因的抗腫瘤藥物的活性大小的方法。

為實現上述第一個目的，本發明采取的技術方案是：

一種含有MALAT1啟動子序列和報告基因的載體，所述的載體是在pGL3-Basic載體的多克隆位點內插入SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

優選地，所述的SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列插入在pGL3-Basic載體的NheI和BglⅡ酶切位點之間。

為實現上述第二個目的，本發明采取的技術方案是：

如上所述的含有MALAT1啟動子序列和報告基因的載體的構建方法，包括以下步驟：

a）獲得SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；

b）將SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列連接到pGL3-Basic載體的NheI和BglⅡ酶切位點之間。

為實現上述第三個目的，本發明采取的技術方案是：