[發明專利]利用LRP4針對神經傳遞障礙疾病的診斷組合物

無效

• 申請號: 201410075263.9
• 申請日: 2014-03-04
• 公開（公告）號: CN103869064A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 梅林;熊文誠;張斌;沈承勇;羅時文
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: G01N33/564
• 分類號: G01N33/564
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及診斷組合物。

背景技術

神經傳遞障礙疾病重癥肌無力是一種自身免疫疾病，將導致神經肌肉接頭的功能紊亂。70%患有重癥肌無力的病人都攜帶乙酰膽堿受體的自身抗體，另外10%病人攜帶MuSK的自身抗體。但是，20%的病人在血清中檢測不到乙酰膽堿受體或MuSK的自身抗體。因此，需要一種針對神經肌肉相關的疾病如重癥肌無力的診斷組合物。

發明內容

本發明提供了一種針對神經傳遞障礙疾病的診斷組合物。

具體技術方案：

利用LRP4針對神經傳遞障礙疾病的診斷組合物，包括人低密度脂蛋白受體相關蛋白4?LRP4或LRP4模擬表位。

為了達到更好的效果，所述的診斷組合物，還進一步包括聚集蛋白、聚集蛋白模擬表位、乙酰膽堿受體、乙酰膽堿受體模擬表位、肌肉特異性酪氨酸激酶的任一種或幾種。

所述神經傳遞障礙疾病包括重癥肌無力，肌肉萎縮癥，或者先天性肌無力綜合征（CMS）。

本發明還涉及利用LRP4針對神經傳遞障礙疾病的診斷試劑盒，前述診斷組合物。

為了更好的達到檢測的效果，診斷組合物中LRP4或LRP4模擬表位上有可檢測的標簽。這樣檢測結果會更加直觀，便于觀察。

所述標簽可以為¹²⁵I。

所述的診斷試劑盒，還可以通過有色顆粒免疫測定法檢測抗原-抗體復合物。同樣具有直觀的結果呈現效果。

本發明還一種檢測LRP4抗體的方法，所述方法包括檢測由前述的診斷組合物與樣品接觸后所形成的抗原-抗體復合物。

這種檢測LRP4抗體的方法，選自：BIACORE分析、FACS、免疫熒光、免疫細胞化學、免疫印記、放射性免疫分析、ELISA、免疫沉淀反應、沉淀素反應、膠擴散沉淀反應。

本發明的有益效果是：提供了一種效果良好的利用LRP4針對神經傳遞障礙疾病的診斷組合物，填補了目前研究及市場的空缺，具有廣闊的市場前景。

附圖說明

圖1：采用ELISA?方法檢測針對LRP4的自身抗體。

圖2：重癥肌無力的病人血清中檢測不到抗乙酰膽堿受體/MuSK的抗體，但是能檢測到LRP4的自身抗體。

圖3：免疫LRP4胞外端重組蛋白誘發小鼠產生LRP4自身抗體，并引起小鼠重癥肌無力癥狀，肌電圖動物電位不能持續維持。

圖4：注射LRP4胞外端重組蛋白的小鼠神經肌肉接頭形態出現異常，包括乙酰膽堿受體染色呈碎片，突觸前運動神經元退化，突觸小泡密度下降。?

圖5：注射LRP4胞外端重組蛋白的小鼠血清能夠抑制MuSK蛋白的酪氨酸磷酸化，減少LRP4細胞表面定位以及聚集蛋白誘導的乙酰膽堿受體聚集，并部分激活補體反應。

圖6:?注射抗LRP4兔免疫球蛋白IgG的小鼠具有重癥肌無力癥狀。

圖7：采用ELISA?方法檢測針對聚集蛋白的自身抗體。

圖8：聚集蛋白自身抗體陽性的重癥肌無力病人血清能夠識別外源表達的聚集蛋白。

圖9：聚集蛋白自身抗體陽性的重癥肌無力病人血清能夠抑制聚集蛋白引起的乙酰膽堿受體在肌肉細胞中的聚集。

具體實施方式

實施例1?LRP4自身抗體存在于重癥肌無力病人血液，能夠誘發重癥肌無力

自發性免疫疾病重癥肌無力是一種常見的神經突觸疾病，10萬人中約有10-20個患病者。其中約有80%的病人其體內的抗體能夠結合肌肉的乙酰膽堿受體，這些抗體使乙酰膽堿受體數目減少或是失去功能，從而導致神經肌肉傳遞中的肌無力。盡管大部分的重癥肌無力都是由于自身抗體結合乙酰膽堿受體引發的，但是約有20%的病人體內檢測不到乙酰膽堿受體的抗體。2001年，在乙酰膽堿受體抗體陰性的病人中，有約4-50%的病人可以檢測出MuSK抗體。用MuSK胞外區免疫兔后可導致重癥肌無力，乙酰膽堿受體的數目減少。盡管一系列的實驗證明了乙酰膽堿受體和MuSK的抗體導致了重癥肌無力，但是還有10%的病人血清中鑒定不到這些抗體。