[發明專利]誘導體細胞轉分化為神經干細胞的方法及其應用

有效

• 申請號: 201410075246.5
• 申請日: 2014-03-03
• 公開（公告）號: CN104894060B
• 公開（公告）日: 2018-11-06
• 發明（設計）人: 裴鋼;趙簡;程林;胡文祥;裘斌龍
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073;C12N5/071;C12N5/0797;A61K35/30;A61P25/00
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 馬莉華;崔佳佳

1.一種小分子組合物的用途，其特征在于，用于非治療性地在不引入外源性基因且低氧環境下誘導體細胞轉分化為神經干細胞，其中所述小分子組合物由以下組分構成

(a)組蛋白去乙酰化酶(HDACs)抑制劑；

(b)糖原合成酶激酶-3(GSK-3)抑制劑；

(c)轉化生長因子β(TGF-β)信號通路抑制劑；和

(d)任選的藥學上可接受的載體。

2.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的低氧環境為氧濃度3-8％的環境。

3.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的體細胞包括成纖維細胞、上皮細胞。

4.如權利要求3所述的用途，其特征在于，所述的成纖維細胞包括小鼠胚胎成纖維細胞、小鼠尾尖成纖維細胞、人皮膚成纖維細胞。

5.如權利要求3所述的用途，其特征在于，所述的上皮細胞分離自人尿液。

6.一種體外誘導體細胞轉分化為神經干細胞的方法，其特征在于，在低氧環境以及權利要求1或2所述的小分子化合物組合存在的培養條件下，不引入外源基因，培養體細胞。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述的小分子化合物組合中，HDACs抑制劑包括丙戊酸(VPA)、丁酸鈉(NaB)、或曲古抑菌素A(TSA)；和/或

所述的GSK-3抑制劑包括CHIR99021、氯化鋰(LiCl)、或碳酸鋰(Li₂CO₃)；和/或

所述的TGF-β信號通路抑制劑包括Repsox、SB431542、或曲尼司特(Tranilast)。

8.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述小分子化合物組合中各組分的最低有效濃度如下所示：

HDACs抑制劑：VPA：0.2-1mM；NaB 0.2-1mM；TSA 5-20nM；

GSK-3抑制劑：CHIR99021 1-5μM；LiCl 0.5-3μM；Li₂CO₃ 0.05-1mM；

TGF-β抑制劑信號通路：Repsox 0.2-3μM；SB431542 0.2-3μM；Tranilast 10-50μM。

9.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述的培養為至少培養4代。

10.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述的培養條件還包括采用神經干細胞培養基。

11.如權利要求10所述的方法，其特征在于，所述的神經干細胞培養基含有表皮生長因子EGF、堿性成纖維細胞生長因子bFGF、肝素或其組合。

12.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的低氧環境為氧濃度為4-6％。

13.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述小分子化合物組合中各組分的最低有效濃度如下所示：

HDACs抑制劑：VPA：0.3-0.8mM；NaB:0.3-0.8mM；TSA:8-15nM；

GSK-3抑制劑：CHIR99021:2-4μM；LiCl:1-2μM；Li₂CO₃:0.1-0.8mM；

TGF-β抑制劑信號通路：Repsox:0.5-2μM；SB431542:0.5-2μM；Tranilast 20-40μM。