[發明專利]一種菲律賓蛤仔的繁育方法

有效

• 申請號: 201410075131.6
• 申請日: 2014-03-04
• 公開（公告）號: CN103828746A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發明（設計）人: 閆喜武;張躍環;董克遜;楊鳳;張國范
• 申請（專利權）人: 大連海洋大學;閆喜武
• 主分類號: A01K61/00
• 分類號: A01K61/00
• 代理公司: 大連非凡專利事務所 21220
• 代理人: 高學剛

技術領域

本發明涉及海洋農業中貝類遺傳育種技術領域，特別是一種菲律賓蛤仔的繁育方法。

背景技術

菲律賓蛤仔Ruditapes?philippinarum分布于太平洋和印度洋沿岸，具有養殖周期短、投資少、收益大的特點（張國范&閆喜武，2010）。我國是菲律賓蛤仔的養殖大國，年產菲律賓蛤仔約300萬噸左右，占我國貝類產量的30%左右，海水養殖總產量的20%左右，占世界總產量的90%以上（中國漁業協會，2009）。受精生物學是發育生物學的重要組成部分，在理論和生產實踐上都具有重要意義。可為繁育良種提供理論依據。

體外受精的雙殼貝類中，精子入卵時機存在兩種形式，第一種是初級卵母細胞處于第一次減數分裂之前，有胚泡存在，精子入卵后胚泡消失，如巨蠣屬的長牡蠣、葡萄牙牡蠣、香港牡蠣、近江牡蠣、熊本牡蠣等；第二種是初級卵母細胞處于第一次減數分裂的中期，胚泡已經消失，才有受精能力，如蝦夷扇貝、櫛孔扇貝、紫貽貝、蛤仔等，這些貝類在配子發生時期，卵母細胞的減數分裂停滯在第一次減數分裂前期，即發生前期阻滯，故體外解剖的配子幾乎是不能受精的。

菲律賓蛤仔的精子在成熟卵細胞進行第一次成熟分裂中期時進入卵內完成受精作用，屬于雙殼貝類中的第二種受精形式。其受精方式是體外受精，即親本將卵子和精子都排出體外，在水中受精，精子可以在卵表面的任何部位進入，以螺旋卵裂的方式進行卵裂，從而進一步發育。

王昭萍等公開了對比文件1（王昭萍等，2009.?一種能使剝離的貝類卵子體外促熟的方法.?授權公告號：CN?101627733?B），介紹了一種能使剝離的貝類卵子體外促熟的方法，采用兩種化學藥品氨水及5-羥色胺的促熟扇貝剝離卵子，之后完成受精作用，獲得D形幼蟲。但該種方法中精卵的受精率較低，通過實驗證明，何時獲取貝類的精子與卵子會直接影響受精率，但在上述方法中并沒有公開獲得卵子與精子的時機；同時該方法使用了兩種化學藥品對卵子進行促熟，雖然可以實現部分促熟作用，但仍存在藥物殘留，對受精作用有一定的毒害影響，其受精率均較低（僅為40%左右），孵化階段胚胎畸形率較高（30-50%）；并且，上述方法雖然可以獲得一小部分D形幼蟲，但幼蟲存活能力較差，尚未獲得變態后的稚貝。

綜上所述，現在需要一種能夠解決現有技術的不足的新的菲律賓蛤仔的繁育方法。

發明內容

本發明是為了解決現有技術所存在的上述不足，提出一種受精率及孵化率較高，能夠獲得與自然排放配子獲取的子代間無顯著差異子代的菲律賓蛤仔的繁育方法。

本發明的技術解決方案是：一種菲律賓蛤仔的繁育方法，其特征在于：所述的方法按照以下步驟進行：

a、在菲律賓蛤仔性成熟時期，選取性腺飽滿的個體作為親本，親本需保證在陰干、流水刺激后95%以上的個體能夠自然排放配子，

b、取a步驟中選取的親本的性腺樣品，將性腺樣品置于新鮮海水中進行鏡檢，選取顯微鏡下卵子呈現正圓形，卵質為灰黑色、卵膜完整、卵徑一致的個體為雌性親本，其中北方群體的卵徑為70.0±0.5μm，南方群體的卵徑為60.0±0.5μm，選取顯微鏡下精子100%跳動的個體為雄性親本，將獲得的卵子用200目篩絹網過濾，320目篩絹網洗卵，直至卵液澄清為止，將獲得的精子用500目篩絹網過濾，

c、將b步驟所獲得的卵液在新鮮的海水中放置15-45min，直至卵子的生發泡破裂，即為活化成功的卵子，將b步驟所獲得的精子在新鮮的海水中放置5-10min，仍處于跳躍狀態的精子即為有受精能力的精子，

d、將經過c步驟后的精子放置于活化成功的卵液中受精，每個卵子周圍有3-5個精子，采用攪拌的方式進行受精，并微充氣孵化，此后按照菲律賓蛤仔的常規方法進行子代培養，獲得大量稚貝及成體。

本發明同現有技術相比，具有如下優點：

本發明通過確認菲律賓蛤仔的精子與卵子的最佳獲取時機、獲取精卵，海水激活配子、受精孵化等技術環節，突破了菲律賓蛤仔卵母細胞第一次減數分裂前期阻滯，完成受精作用繁育蛤仔子代，創建了一種菲律賓蛤仔繁育的新方法。本發明顛覆了以往認為蛤仔配子只有自然排放才可以獲取子代的傳統觀念，創建了一套蛤仔繁育新技術，為蛤仔苗種繁育、選擇育種、雜交育種、多倍體育種等提供了新的思路。并且本發明未使用任何化學藥品，無污染；它的受精率及孵化率較高，均在90%以上；同時它在獲得正常D形幼蟲的基礎上，可以培養出大量稚貝及成體，從其生長及存活能力上看，本發明獲取的子代與自然排放配子獲取的子代間無顯著差異。因此可以說這種方法具有操作簡便、實用性強、易于推廣等優點。