[發(fā)明專利]含有抑制黑色素生成的siRNA細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410073669.3
• 申請(qǐng)日: 2014-03-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103860444B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-11-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周萱
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 奧思達(dá)干細(xì)胞有限公司
• 主分類號(hào): A61K8/98
• 分類號(hào): A61K8/98;A61K8/60;A61K8/73;A61Q19/02;A61Q19/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種含有抑制黑色素生成的siRNA細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液，其特征在于：由以下組分組

成：表皮細(xì)胞培養(yǎng)液濃縮液79.3%、抑制黑色素的siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物0.5%、甘油20%和玻尿酸0.2%；其中，所述的抑制黑色素的siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物是由低熔點(diǎn)陽(yáng)離子脂質(zhì)體SUV與siRNA產(chǎn)物在無(wú)菌生理鹽水中按摩爾比1:1混合均勻得到的，其中，所述的siRNA為根據(jù)目的DNA序列設(shè)計(jì)的siRNA，長(zhǎng)度為21nt，序列為：

正義鏈：5’GUACAACAGCCAUCAGUCUUU

反義鏈：5’CUCAUGUUGUCGGUAGUCAGA。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含有抑制黑色素生成的siRNA細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液，其特

征在于：所述的表皮細(xì)胞培養(yǎng)濃縮液是表皮細(xì)胞培養(yǎng)液按照5:1的體積比例濃縮制成。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含有抑制黑色素生成的siRNA細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液，其特

征在于： 所述的siRNA的目的DNA序列是由美國(guó)國(guó)家衛(wèi)生研究院的NCBI標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫(kù)中選酪氨酸酶基因tyr片段序列。

4.權(quán)利要求1所述的一種含有抑制黑色素生成的siRNA細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液的制備方法，

其特征在于：由下述步驟組成：

步驟1）選定目的DNA序列：以酪氨酸酶作為靶點(diǎn)，根據(jù)美國(guó)國(guó)家衛(wèi)生研究所的NCBI標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫(kù)中選酪氨酸酶基因tyr片段序列為靶序列；

步驟2）設(shè)計(jì)并合成siRNA：根據(jù)tyr基因設(shè)計(jì)siRNA片段，并用化學(xué)合成法合成；

步驟3）制備siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物：用低熔點(diǎn)陽(yáng)離子脂質(zhì)體SUV與步驟2）得到的siRNA產(chǎn)物，在生理鹽水中按摩爾比1:1均勻混合，制成siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物；

步驟4）收集人表皮細(xì)胞培養(yǎng)液：采集獲取新生兒臍帶表皮細(xì)胞，原代培養(yǎng)3-5天，傳代培養(yǎng)3-6代，收集培養(yǎng)液；

步驟5）原液過(guò)濾：收集的細(xì)胞培養(yǎng)液經(jīng)過(guò)過(guò)濾系統(tǒng)，濾去細(xì)胞碎片及微生物；

步驟6）過(guò)濾液濃縮：過(guò)濾液置于超濾管中低溫高速離心，得到的濃縮液置于4℃冰箱儲(chǔ)存；

步驟7）加入甘油及玻尿酸：向步驟6）所述的濃縮液中加入步驟3）所述的siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物以及醫(yī)用甘油和玻尿酸原液，混合均勻，即制備完成精華液。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種含有抑制黑色素生成siRNA的細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液的制備

方法，其特征在于：所述的步驟1）中，目的DNA序列為：

ATGCTCCTGG CTGTTTTGTA CTGCCTGCTG TGGAGTTTCC AGACCTCCGC

TGGCCATTTC CCTAGAGCCT GTGTCTCCTC TAAGAACCTG ATGGAGAAGG

AATGCTGTCC ACCGTGGAGC GGGGACAGGA GTCCCTGTGG CCAGCTTTCA

GGCAGAGGTT CCTGTCAGAA TATCCTTCTG TCCAATGCAC CACTTGGGCC

TCAATTTCCC TTCACAGGGG TGGATGACCG GGAGTCGTGG CCTTCCGTCT

TTTATAATAG GACCTGCCAG TGCTCTGGCA ACTTCATGGG ATTCAACTGT。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種含有抑制黑色素生成的siRNA細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液的制備方法，其特征在于：所述的步驟3）中siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物濃度為20ug/ml。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種含有抑制黑色素生成的siRNA細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液的制備方法，其特征在于：所述的步驟4）中原代培養(yǎng)基為NaHCO₃的含量為0.37%的高糖DMEM培養(yǎng)基，胎牛血清含量20%；傳代培養(yǎng)基為NaHCO₃的含量為0.37%的高糖DMEM培養(yǎng)基，胎牛血清含量5%，消化細(xì)胞所用的消化液是不含EDTA的0.025%的胰酶，消化細(xì)胞的條件為37℃，CO₂濃度5%，3分鐘；收集的細(xì)胞培養(yǎng)液為細(xì)胞第3-6代的細(xì)胞培養(yǎng)液。