[發明專利]一種牡蠣種間核質互換新品系的制種方法

有效

• 申請號: 201410072660.0
• 申請日: 2014-02-28
• 公開（公告）號: CN103814846A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 張躍環;喻子牛;肖述;張揚
• 申請（專利權）人: 中國科學院南海海洋研究所
• 主分類號: A01K61/00
• 分類號: A01K61/00
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

技術領域：

本發明屬于現代海洋農業中貝類遺傳育種技術領域，具體涉及一種牡蠣種間核質互換新品系的制種方法。

背景技術：

種間雜交是動、植物基本育種手段之一，特點是它可以顯著的擴大動植物的基因庫，促進種間交流，引入異種有利基因，創造出新的變異類型，甚至會合成新的物種（樓允東，1999）。

目前，我國的牡蠣種間雜交技術日益成熟，學者們培育出大量的可存活牡蠣種間雜種（張躍環等，2014）。其中，包括香港牡蠣×長牡蠣（Zhang等，2012）、香港牡蠣×葡萄牙牡蠣（Zhang等，2014）、香港牡蠣×近江牡蠣（Huo等，2013）、長牡蠣×近江牡蠣（張躍環等，2012）、熊本牡蠣×近江牡蠣（Xu等，2009）等種間雜交組合。

發明內容：

本發明的目的是提供一種牡蠣種間核質互換新品系的制種方法，利用該方法能夠培育出具有高產、優質、穩定遺傳等優點的新品系。

經過我們研究發現，所有的巨蠣屬牡蠣種間雜種均為細胞質母系遺傳，而細胞核兩性融合的特點，且處于雜合狀態的細胞核具有遺傳分離現象。作為牡蠣，無法采用魚類細胞核移植技術進行核質互換品系制備，獲得穩定遺傳的核質互換種質資源。為了解決以上問題，本發明通過細胞核雜交系制備、同型核系優先選配、核質互換系篩選、核質互換系自繁等技術手段開發出一套高效的核質互換新品系的制種方法，為牡蠣的種質資源拓寬及良種培育奠定了良好理論與實踐基礎。

本發明的牡蠣種間核質互換新品系的制種方法，其特征在于，包括以下步驟：

a、細胞核雜交系制備：利用巨蠣屬兩個不同物種牡蠣進行雜交，獲得細胞質穩定遺傳、細胞核處于雙親融合狀態的雜交系；

b、同型核系優先選配：以a步驟中雜交系為母本，與雜交系母本不同的親本種作為父本進行測交；

c、核質互換系篩選：經過檢測，發現b步驟獲得的測交子代中，包括核質互換系，核質恢復系和細胞核雜交系，篩選出核質互換系。絕大部分為核質互換系，還有少部分核質恢復系及其細胞核雜交系；

d、核質互換系自繁：利用c步驟篩選出的核質互換系作為親本自繁，即可獲得核質互換新品系。

所述的巨蠣屬兩個不同物種牡蠣可以為香港牡蠣、近江牡蠣、長牡蠣、葡萄牙牡蠣、熊本牡蠣等任意兩個物種組合。

本發明通過牡蠣細胞核雜交系制備、同型核系優先選配、核質互換系篩選、核質互換系自繁等技術手段，開發出新的牡蠣種質資源。本發明利用牡蠣細胞質母系遺傳特性，克服了長期以來牡蠣無法利用細胞核移植技術進行種質改良的缺陷，創建了一套高效的核質互換新品系的制種方法。本發明培育的新品系，具有高產、優質、穩定遺傳等優點，可以提高產量30%以上（相對雙親）。本發明具有實用性強，易于推廣等優點。

附圖說明：

圖1為本發明技術路線圖。其中，小圈表示細胞核，大圈表示細胞質。

具體實施方式：

以下實施例是對本發明的進一步說明，而不是對本發明的限制。

實施例1

如圖1所示，本實施例的牡蠣種間核質互換新品系的制種方法，包括以下步驟：

a、細胞核雜交系制備：于2010年7月，在大連莊河海洋貝類苗種場以雌性香港牡蠣個體與雄性長牡蠣個體進行種間雜交，獲得雜種HG。其中，雜種HG細胞質均來源于香港牡蠣，而細胞核來源于雙親。

b、同型核系優先選配：經過一周年的養成，于2011年7月，在大連莊河海洋貝類苗種場以發現雜種HG中有10-20%雌性完全可育個體，利用雌性雜種HG與其雄性長牡蠣G進行測交，獲得了大量測交子代。

c、核質互換系篩選：參照Wang&Guo（2008）的分子方法檢測，發現b步驟獲得的子代中，70%為核質互換系，還有20%核質恢復系及10%細胞核雜交系。為此，篩選出核質互換系。

d、核質互換系自繁：于2012年7月，在大連莊河海洋貝類苗種場利用c步驟篩選出的核質互換系作為親本自繁，獲得300萬核質互換新品系。經過分子手段檢測，其核質互換系100%穩定遺傳。經過一周年養成，發現其產量相對長牡蠣提高了36%，相對于香港牡蠣提高了75%。

實施例2

如圖1所示，本實施例的牡蠣種間核質互換新品系的制種方法，包括以下步驟：

a、細胞核雜交系制備：于2010年7月，在大連莊河海洋貝類苗種場以雌性長牡蠣個體與雄性近江牡蠣個體進行種間雜交，獲得雜種GA。其中，雜種GA細胞質均來源于長牡蠣，而細胞核來源于雙親。