[發明專利]一種基于熒光蛋白分布比例的土壤內可利用氮素的檢測方法

有效

• 申請號: 201410071519.9
• 申請日: 2014-03-03
• 公開（公告）號: CN103808943A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發明（設計）人: 劉玉濤;丁為民;陳玉侖;高瑾
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于熒光蛋白分布比例的土壤內可利用氮素的檢測方法，其特征在于：對所用釀酒酵母菌株細胞中的自噬蛋白Atg8進行熒光標記；根據顯微熒光照片或蛋白質印跡法(western-blot)的結果，建立可利用氮素水平與酵母菌株細胞中熒光蛋白在液泡分布比例的關系；收集1g待測土壤，與10mL去離子水在搖床上100rpm振蕩24h得到土壤水萃液，然后高速離心5min，取上清液，高溫滅菌后備用；將自噬相關蛋白Atg8已被熒光蛋白標記的酵母細胞在50mL液體SD-Ura培養基中培養至OD600≈1.0時，取30mL培養液經離心、無菌水洗滌后轉入以無菌的上清液為唯一氮源的培養基中；培養一定時間后，計算熒光蛋白在液泡內的分布比例；并根據所建立的關系推算土壤內可利用氮素的量。

2.根據權利要求1所述的一種基于熒光蛋白分布比例的土壤內可利用氮素的檢測方法，其特征在于：所述的關系是指已知氮素水平與Atg8進入液泡的比例之間的關系。

3.根據權利要求1所述的一種基于熒光蛋白分布比例的土壤內可利用氮素的檢測方法，其特征在于：所述的檢測方法是以土壤水萃液作為唯一氮源，進行釀酒酵母細胞培養，根據其內Atg8進入液泡的比例來推算可利用氮素含量的方法。