[發明專利]一種中藥材多指標成分含量的快速測定方法

有效

• 申請號: 201410068578.0
• 申請日: 2014-02-27
• 公開（公告）號: CN103884676A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 吳永江;劉雪松;吳春艷;欒連軍;金葉;李頁瑞;李振國;倪開嶺;黃靖梅
• 申請（專利權）人: 浙江大學;牡丹江友搏藥業股份有限公司
• 主分類號: G01N21/359
• 分類號: G01N21/359;G01N5/04;G01N30/02;G01N31/16
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;趙杭麗

技術領域

本發明屬于中藥質量控制技術領域，涉及一種以近紅外光譜快速測定中藥多指標成分含量的快速測定方法，尤其涉及一種水蛭或地龍藥材多指標成分含量的快速測定方法。

背景技術

水蛭是一味傳統中藥，有效成分包括氨基酸、多肽、次黃嘌呤、黃嘌呤、總磷脂、多糖、生物活性物質等。近年來，發現其對心腦血管疾病具有很好的治療作用，臨床上用于腦血栓、冠狀動脈粥硬化性心臟病及腦水腫的治療。

地龍具有悠久的藥用歷史，富含多種氨基酸、核酸成分，具有抗血栓、抗癌、增強免疫、抗潰瘍、保肝等作用。近幾十年對地龍的化學成分和藥理作用研究，臨床用于咳喘、頭痛目赤、咽喉腫痛、小便不通、風濕關節炎、半身不遂等癥。

水蛭和地龍藥材是我國常用藥材之一，因來源復雜，成分含量差異很大。過去藥材的傳統投料方式直接影響其成品質量的均一性，甚至導致成品批次間的較大差異，本發明能夠科學準確控制藥材的投料量。

近紅外光譜分析技術，近年來隨化學計量學而迅速發展，已經越來越多被應用于中藥研究，包括藥材產地鑒別、有效組分含量測定和制藥過程的在線檢測，實現了快速測定藥材的有效成分，杜絕盲目投料，科學控制投料量。

發明內容

本發明的目的在于提供一種中藥材多指標成分含量的快速測定方法，是一種基于近紅外光譜快速測定水蛭和地龍藥材多指標成分含量的快速測定方法，可實現快速評價水蛭和地龍藥材綜合質量。所述中藥材包括水蛭和地龍藥材。

本發明是通過以下技術方案實現：

（1）采集水蛭或地龍藥材的近紅外光譜：將不同產地、不同采收季節的水蛭或地龍藥材，置恒溫烘箱中除去表面水分，打粉過篩并取適量水蛭或地龍藥材粉末置近紅外光譜儀的旋轉杯中，平鋪1?cm厚度的藥材粉末，保持粉末表面平整，使用近紅外積分球漫反射采集光譜，以空氣為參比，掃描次數為32，分辨率為8?cm^-1，吸光度數據格式為：log1/R，光譜掃描范圍為4000～10000?cm^-1，將得到的光譜數據分為校正集和驗證集兩類。

（2）測定水蛭或地龍藥材的多指標成分含量：水蛭或地龍藥材的多指標成分相同，都包括水分、可溶性固形物、次黃嘌呤、總糖和多糖及游離氨基酸和多肽。采用烘干法測定水分和可溶性固形物，間接碘量法（碘液-硫代硫酸鈉滴定法）測定總糖和多糖，高效液相色譜法測定次黃嘌呤、游離氨基酸和多肽。

（a）水分含量的測定：采用《中國藥典》——烘干法測得水蛭或地龍藥材的水分含量，采集水蛭或地龍藥材的近紅外光譜后，取適量水蛭或地龍藥材粉末于105℃的恒溫干燥箱中5?h，在干燥器中冷卻20～30?min后稱量，再在105℃下干燥1?h，冷卻，稱重，至連續兩次稱重的差異不超過5?mg，根據減失的重量，計算樣品的水分含量。

（b）可溶性固形物含量的測定：采用烘干法測定水蛭或地龍藥材的可溶性固形物含量；精密移取0.1?g/mL的水蛭或地龍藥材浸提液4?mL至已烘干至恒重的扁形瓶（X₀），稱重（X₁），置105℃烘箱中，每隔一個小時稱重，直至連續兩次稱重重量差距小于5?mg，最終重量計X₂，可溶性固形物（%）＝（X₂－X₀）／（X₁－X₀）×100%，計算樣品的可溶性固形物含量。

（c）次黃嘌呤含量的測定：采用HPLC測定水蛭或地龍藥材的次黃嘌呤含量；取適量0.1?g/mL的水蛭或地龍藥材浸提液過濾膜，取濾液進樣10?μl，按如下HPLC色譜條件用高效液相色譜法測定峰面積，用外標法計算樣品的次黃嘌呤含量；

次黃嘌呤HPLC色譜條件：色譜柱Eclipse?XDB-C18柱(4.6?mm×250?mm，5?μm)；流動相A：0.01?mol/L磷酸二氫鉀溶液；流動相B：50％甲醇；梯度洗脫步驟：0～5?min為100%A相，5～10?min為100%～99%A相，10～50?min為99%～0%A相，后運行10?min；檢測波長254?nm；進樣量10?μl；柱溫25?℃；流速1?mL/min。

（d）總糖和多糖含量的測定：采用間接碘量法的碘液-硫代硫酸鈉滴定法測定水蛭或地龍藥材的總糖和單糖，依據硫代硫酸鈉的消耗量，先計算碘液的消耗量，再計算樣品的總糖和單糖，多糖含量通過總糖含量減去單糖含量得到。