[發明專利]TAT核心肽段在制備高效、可溶性表達的外源蛋白中的應用

在審

• 申請號: 201410067808.1
• 申請日: 2010-03-08
• 公開（公告）號: CN103865945A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 張成崗;吳永紅;高艷
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N15/75;C07K14/155
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 魯兵

1.TAT核心肽段在制備高效、可溶性表達的外源蛋白中的應用。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述TAT核心肽段，是含有一個或多個TAT核心多肽編碼區的原核表達載體。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于：所述TAT核心多肽編碼區為能夠根據三聯體密碼組合成其氨基酸序列的任意核酸編碼序列，如序列表中序列1所示。

4.根據權利要求2或3所述的應用，其特征在于：所述TAT核心多肽編碼區優選的核苷酸序列可如序列表中序列2所示。

5.根據權利要求2或3或4所述的應用，其特征在于：用于構建所述原核表達載體的出發載體為pET28、pBV220、pET30、pCRT7/CT-TOPO、pET101/D-TOPO或pQE30。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：所述出發載體為pET28b，以一個TAT核心多肽編碼區構建得到的原核表達載體，命名為pET28b-TAT。

7.根據權利要求2或3或4或5或6所述的應用，其特征在于：將外源蛋白編碼基因插入所述的原核表達載體中得到含有TAT核心多肽編碼區和外源基因的原核表達載體，所述TAT核心多肽編碼區可以置于外源蛋白編碼序列的上游或下游。

8.根據權利要求1至7任一所述的應用，其特征在于：所述外源蛋白包括有生物活性的外源蛋白以及有指示功能的蛋白。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于：所述有生物活性的外源蛋白包括但不限于腦紅蛋白（NGB），有指示功能的蛋白包括但不限于增強型綠色熒光蛋白（EGFP）。

10.根據權利要求7至9任一所述的應用，其特征在于：制備高效、可溶性表達的外源蛋白還包括以下過程：

1)將含有TAT核心多肽編碼區和外源基因的原核表達載體向原核表達體系轉化，原核表達體系為大腸桿菌、枯草桿菌等，所述大腸桿菌為E.coli?BL21（DE3）、E.coli?BL21(DE3)plys、BLR(DE3)、B834、DH5α、HB101或JM109等；

2)原核表達體系用化學試劑或低溫進行誘導表達，化學試劑誘導表達條件為：終濃度1mM的誘導劑IPTG誘導表達；誘導表達的OD₆₀₀=0.6-1.0；誘導表達時間6-8小時；低溫誘導表達條件為：采用平皿涂布制備克隆；4℃低溫誘導表達；誘導表達時間4天；以及外源蛋白的收集。