[發(fā)明專利]一種海豚鏈球菌細(xì)菌素及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410067698.9
• 申請日: 2014-02-26
• 公開（公告）號(hào): CN103804475A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫黎;李墨非
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院海洋研究所
• 主分類號(hào): C07K14/315
• 分類號(hào): C07K14/315;A61K38/16;A61P37/06
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫學(xué)領(lǐng)域，具體的說是一種海豚鏈球菌細(xì)菌素及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

細(xì)菌素(Bacteriocin)是由細(xì)菌在代謝過程中通過核糖體合成產(chǎn)生的一類具有抑菌活性的多肽、蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)復(fù)合物。細(xì)菌素通常由革蘭氏陽性菌產(chǎn)生并可以抑制其他的革蘭氏陽性菌，如乳球菌、葡萄桿菌、利斯特氏桿菌等，對大多數(shù)的革蘭氏陰性菌、真菌等均沒有抑制作用。這些廣譜抗菌的細(xì)菌素對抑制食品、乳制品在保藏及發(fā)酵過程中所產(chǎn)生的有害菌有著重要的作用。細(xì)菌素可以和敏感細(xì)菌的膜表面受體分子相互作用，在細(xì)胞膜上形成小孔，進(jìn)而殺死細(xì)菌。然而，細(xì)菌素對動(dòng)物免疫應(yīng)答方面的調(diào)控作用則尚未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種海豚鏈球菌細(xì)菌素的免疫調(diào)控應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種海豚鏈球菌細(xì)菌素，細(xì)菌素為序列表SEQ?ID?No.1中的氨基酸序列所示。

海豚鏈球菌細(xì)菌素的應(yīng)用，所述細(xì)菌素蛋白用于制備抑制魚類免疫細(xì)胞的免疫活性抑制劑。

所述細(xì)菌素蛋白用于制備抑制大菱鲆免疫細(xì)胞的免疫活性抑制劑。

本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明的海豚鏈球菌細(xì)菌素能夠明顯抑制魚類免疫細(xì)胞的活性。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例提供的純化的細(xì)菌素蛋白。其中，泳道1，分子量標(biāo)準(zhǔn)；泳道2,細(xì)菌素。

圖2為本發(fā)明實(shí)施例提供的細(xì)菌素對魚類免疫細(xì)胞（即大菱鲆單核細(xì)胞）的免疫抑制效應(yīng)圖。其中，A為細(xì)胞的呼吸爆發(fā)活性；B為細(xì)胞的酸性磷酸酶活性。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。實(shí)施例旨在對本發(fā)明進(jìn)行舉例描述，而非以任何形式對本發(fā)明進(jìn)行限制。

在本發(fā)明實(shí)施例中所涉及到的常規(guī)性實(shí)驗(yàn)方法均采用如下方法：

1.質(zhì)粒提取、DNA(PCR)產(chǎn)物純化、DNA片段從凝膠中回收皆使用“天根生化科技(北京)有限公司”的相應(yīng)試劑盒。

2.大腸桿菌用Hanahan方法（Sambrook?and?Russell:Molecular?Cloning:A?Laboratory?Mannual.Cold?Spring?Harbor?Laboratory?Press2001）；酵母轉(zhuǎn)化按Invitrogen公司的方法（Catalog?no.V175-20）；聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS－PAGE）按照Sambrook?and?Russell:Molecular?Cloning:A?Laboratory?Mannual.Cold?Spring?Harbor?Laboratory?Press2001。

3.所有限制性內(nèi)切酶和連接酶皆購自于“紐英倫生物技術(shù)有限公司”，北京。

實(shí)施例1

本發(fā)明的海豚鏈球菌細(xì)菌素(命名為Sil)為序列表SEQ?ID?No.1中的氨基酸序列。

序列表SEQ?ID?No.1為：

MKKISKIWAVGLVAASLSFGSIAYAESISVAGGTWNYGYGVGQAYSHYKHDYNNHGAKVVNSNNGVKDYKNAGPGVWAKASIGTVWDPATFYYNPTGFYSN

（a）序列特征：

●長度：101

●類型：氨基酸序列

●鏈型：單鏈

●拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)：線性

（b）分子類型：蛋白質(zhì)

（c）假設(shè)：否

（d）反義：否

（e）最初來源：海豚鏈球菌

結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：該蛋白預(yù)期含有一個(gè)信號(hào)肽（氨基酸1－25）。

實(shí)施例2

細(xì)菌素Sil重組蛋白的制備

1）表達(dá)Sil重組蛋白的質(zhì)粒pSil的構(gòu)建：